ELISA-Kit für Maus-Knochenformproteinrezeptor 1A (BMPR-1A)

ELISA-Testkit für Maus-Knochenformationsproteinrezeptor 1A (BMPR-1A)

In diesem Kit wird ein Dual-Antikörper-Cluster-Enzyme-Binded-Immunabsorptionstest durchgeführt ( ELISA）。 In der Vorverpackung Knochenbildungsproteinrezeptor 1A (BMPR1A)Antikörper (Festphase-Antikörper) in Mikroporose-Markierungsplatten, hinzugefügt Knochenbildungsproteinrezeptor 1A (BMPR1A) Kalibriert und zu prüfende Proben, fügen Sie eine andere Sorte hinzu Widerstand gegen HRP-Markierungen Knochenbildungsproteinrezeptor 1A (BMPR1A) (Enzym-basierter Antikörper), nach Warmzüchtung und ausreichender Wäsche, entfernen Sie die nicht gebundenen Komponenten und bilden einen festen Antikörper auf der Mikroporplattenfläche -Antigen-Enzym-markierte Antikörper-Komplex. Substrate A und B, Substrate, die unter HRP-Katalyse ein blaues Produkt erzeugen und unter Wirkung von Endflüssigkeit (2M Schwefelsäure) schließlich in Gelb verwandeln, Absorptionsgrad (OD-Wert), Absorptionsgrad (OD-Wert) und Messprobe auf einem Enzym-Skalierer mit einer Wellenlänge von 450 nm bestimmen Knochenbildungsproteinrezeptor 1A (BMPR1A)Die Konzentration ist abhängig. Passend an die Kalibrierkurve, kann in der Probe berechnet werden Mäuse (BMPR1A)Konzentration.

Benötigte Ausrüstung und Reagenzien

1、 Enzym-Marker (Wellenlänge 450nm Filter)

2、37°C Thermostat (keine Zellkultur mit CO2 empfohlen)

3、 Automatische Spülmaschine oder Mehrkanalpipette / 5ml Tropfen (für die Handwäsche)

4、 Sterile. EP-Rohr und Einweg-Saugkopf

5、 Präzise Einweg (0,5-10 μL, 5-50 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL) und mehrkanale Pipetten (vor der Verwendung kalibriert).

6、Absorbierpapier und Probenaufnahme

7、Desionisiertes oder destilliertes Wasser

Zusammensetzung des Kits:

Probensammlung :

1、Das Probegerät zur Sammlung von Blut sollte ein einmaliges thermogenfreies, endotoxinfreies Probegerät sein.

2、 Empfohlene Verwendung von Plasma-Antikoagulanten EDTA 。 Vermeiden Sie die Verwendung von blutlösen, hyperlipidischen Proben.

3、Die Probe muss klar und transparent sein, die Suspension muss zentrifugiert entfernt werden.

4、 Wenn die Probe nach der Sammlung nicht rechtzeitig erkannt wird, teilen Sie sie bitte nach einer Verwendung auf und einfrieren Sie sie in -20 ° C, -70 ° C in einem elektrischen Kühlschrank, vermeiden Sie wiederholtes Gefrieren und Schmelzen, innerhalb von 3-Juni zu erkennen.

5、 Wenn die Detektorkonzentration in Ihrer Probe höher ist als der Standardwert, bitte je nach Umstand, Die richtige Vielfache verdünnen (Es wird empfohlen, ein Vorexperiment durchzuführen, um das Verdünnungsvermöglichte zu bestimmen.)

Lagerbedingungen:

Probenahme und Aufbewahrung：

1、 Serum-Vollblutproben bei Raumtemperatur platzieren 2 Stunden oder 2-8 ° C über Nacht. 1000 x g 20 Minuten zentrifugieren und aufnehmen. Es kann sofort detektiert werden oder auf einmalige Dosen bei -20°C oder -80°C gefriert werden.

2、 Empfohlene Verwendung von Plasma-Antikoagulanten EDTA-Na2/K2， Die Probe wurde innerhalb von 30 Minuten bei 2-8 ° C, 1000 x g 15 Minuten zentrifugiert und aufgenommen. Es kann sofort nachgewiesen werden oder auf einmalige Dosen bei -20°C oder -80°C gefriert werden. Für die Verwendung und Auswahl anderer Antikoagulante lesen Sie bitte die Anleitung zur Probenvorbereitung.

3、Gewebeproben Gewebeproben werden in der Regel aus Gewebehomogenen hergestellt, die Behandlungsmethode ist wie folgt:
3.1、 Zielgewebe auf Eis setzen, mit vorgekühltem Der PBS-Puffer (0,01 M, pH = 7,4) wird gewaschen, um das restliche Blut zu entfernen und nach der Wiegung zurückgesetzt.

3.2、 Schleifen Sie das Gewebe auf Eis mit einem Lyst. Das Volumen des zugefügten Lysats hängt vom Gewicht des Gewebes ab, in der Regel pro 1 g Gewebefragmente mit 9 ml Lyst. Es wird auch empfohlen, Protease-Inhibitoren wie 1mM PMSF in die Lysate hinzuzufügen.

3.3、 Wiederverwendbares Ultraschallbrechen oder wiederholtes Gefrierschmelzen zur Weiterverarbeitung (Bei der Ultraschallbrechung muss ein Eisbad gekühlt werden; die wiederholte Gefrierschmelzung kann zweimal wiederholt werden.)

3.4、 Die vorbereitete Flüssigkeit wird in 5000×g 5 Minuten zentrifugieren und nachweisen lassen. Oder auf einmalige Dosen bei -20°C oder -80°C einfrieren.

3.5、 Abhängig von den experimentellen Bedürfnissen kann die Gesamtproteinkonzentration zunächst durch die Gewebehomologationsprobe bestimmt werden. Um die Datenanalyse zu erleichtern, wird die BCA-Methode empfohlen. Die Gesamtproteinkonzentration wird im Allgemeinen auf 1-3 mg/ml für den ELISA-Test angepasst. Einige Gewebeproben, wie Leber, Nieren und Bauchspeicheldrüse, reagieren bei höheren Probenkonzentrationen mit dem farbigen Substrat und zeigen falsche Positiven, da sie hohe Konzentrationen an endogenen Peroxidasen enthalten. Versuchen Sie, mit 1% H2O2 zu deaktivieren, um 15 min nachzuweisen.

Hinweis: Häufig verwendet PBS-Puffer oder mittelstärkes RIPA-Lyst. Bei der Verwendung muss der PH-Wert auf PH7,3 angepasst werden, um die Verwendung von Komponenten mit NP-40, Triton X-100 und DTT zu vermeiden, die die Arbeit des Kits stark behindern können. Es wird empfohlen, 50 mM Tris + 0,9% NaCL + 0,1% SDS, PH 7,3 zu verwenden.

4、 Die Zellkultur sammelt die Flüssigkeit, Zentrifugieren Sie bei 2-8 ° C, 2500 rpm für 5 min und sammeln Sie die geklärte Zellkultur auf Clear. Zur sofortigen Prüfung oder zur Eingangsaufteilung bei -80°C zum Gefrieren.

5、Zellulysat

5.1、 Sammlung und Spaltung von suspendierten Zellen: 2-8 ° C, 2500rpm Zentrifugieren 5min, sammeln Sie die Zellen. Fügen Sie das vorgekühlte PBS hinzu, mischen Sie vorsichtig und waschen Sie bei 2-8 ° C, 2500 rpm und zentrifugieren Sie für 5 min, um die Zellen zu sammeln. Fügen Sie 0,5-1 ml Zell-Lyse und eine angemessene Menge an Protease-Inhibitoren (z. B. PMSF, Arbeitskonzentration 1 mmol / L) hinzu, legen Sie auf Eis und lösen Sie 30 min-1 h oder kombinieren Sie Ultraschall-Zerstörung.

5.2、 Sammlung und Auflösung der klebenden Zellen: Absaugen Sie die Oberflüssigkeit und fügen Sie die vorgekühlte PBS dreimal waschen. Fügen Sie 0,5-1 ml Zellulysat und eine angemessene Menge an Protease-Inhibitoren (z. B. PMSF, Arbeitskonzentration 1 mmol / L) hinzu und kratzen Sie die Zellen leicht unter der Wand. Die Zellsuspension wird in ein Zentrifugerrohr übertragen, auf Eis gelegt und 30 min-1 h aufgelöst oder mit Ultraschall gebrochen.

5.3、 Die Zentrifuge kann während der Zellklitzung mit einem Pistolenkopf geschlagen oder unterbrochen geschüttelt werden, um das Protein vollständig zu spalten Die klebrige Form ist DNA, die mit Ultraschall zerstört werden kann. (Oder mit Ultraschall 3-5mm-Sonde, Leistung 150-300W, auf Eis Ultraschallbehandlung Probe, 1-2 Sekunden arbeiten, 30 Sekunden anhalten, 3-5 Zyklen.) )

5.4、 Cracking oder Ultraschall Brechen Fertigstellung, 2-8°C, 10.000 Umdrehungen pro Minute Zentrifugieren 10 min, Aufklärung in ein EP-Rohr verschieben, sofort zur Prüfung oder nach Einsatzmenge bei -80°C eingefroren.

ELISA-Testkit für Maus-Knochenformationsproteinrezeptor 1A (BMPR-1A)

Hinweis:Hinweise und Organisationsproben.

Hinweis: Dies ist nur zur Referenz! Wir hoffen, dass diese Informationen Ihnen helfen, die richtige Wahl zu treffen!