Menschliche Eierstockkrebszelle SNU-840 ATCC

Einer, Menschliche Eierstockkrebszelle SNU-840 ATCCAufbaubedingungen

Zwei, Menschliche Eierstockkrebszelle SNU-840 ATCCNachlieferung

Erholungszellenbehandlung:Füllen Sie die Kulturflüssigkeit und verschließen Sie die Flaschenmünde nach der Kultivierung in gutem Zustand ist die beste Möglichkeit, Zellen zu transportieren. Empfangen von Zellen75% Alkohol SprayZellenFlasche，Streng sterilDanachDie Zellflasche in der Kultivkammer setzen2-4 Stunden zur Stabilisierung der Zellen。Nach der RuheDas Mikroskop beobachtet das Zellwachstum und fotografiert verschiedene Vielfache der Zellen (Am besten.40x, 100x, 200x jeweils)，Fotos der ersten drei TagejaWichtige Nachverkaufsgrundlage, keine Standardfotos erhalten in gutem Zustand.

Verfahrensweise zur Zellbehandlung:Nach dem Empfang der Zellen, beobachten Sie, ob es Trockeneis in der Schaumstoffkaste gibt, ob das Gefrierrohr intakt ist oder nicht, wenn es eine Auffrierung gibt, wenn Trockeneis verdampft oder das Gefrierrohr ein Auffrierungsschäden hat, bitte rechtzeitig ein Foto aufnehmen und uns kontaktieren. Wenn die Zelle sich nicht innerhalb von drei Tagen nach der Unterzeichnung mit uns in Verbindung setzt, wird die Lieferung standardmäßig als gut empfangen angesehen. Erholung der ersten Röhre Wenn es Probleme mit der Aktivität gibt, kontaktieren Sie uns bitte rechtzeitig, der Techniker kommuniziert mit Ihnen, um die Anleitung zu erhalten, bevor Sie die zweite Röhre erholen,Nicht mit uns in Verbindung zu treten, wenn es zu Problemen mit der Wiederherstellung der zweiten Rohre nicht nach dem Verkauf.

Schritte der Zellkultur

und a,Zellenübertragung：wennNicht überschrittenBei 80% Konvergenz wird die in Flaschen gefüllte Kultur in ein Zentrifugerrohr gesammelt, 5 ml Medium zurückgelassen und in 37 ° C, 5% CO gelegt.₂Inkubationskastenkultur;Wenn die ZelldichteSuper80% können kultiviert werden.。

WandzellenDie Schritte sind wie folgt:

1) Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS, das keine Kalzium- und Magnesiumionen enthält;

2) Fügen Sie 1 ml Verdauungsflüssigkeit (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) in der Kultivflasche hinzu, lassen Sie die Kultivflasche 1 min verdauen und beobachten Sie dann die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die Zellen sich größtenteils runden und abfallen, nehmen Sie schnell den Arbeitstisch zurück, klicken Sie auf die Kultivflasche nach ein paar Klicks, fügen Sie 6 ml Serum mit 10%KulturmediumBeendigung der Verdauung;

3) sanft schlagen die Zellen, nach dem Abfallen in das Zentrifugerrohr, 1000 rpm Zentrifuge 5-8min, entfernen Sie die Oberflüssigkeit, 1-2mL Medium nach dem Zusatz blasen;

4) Die Zellsuspension wird in einem Verhältnis von 1: 2 in eine neue 6-cm-Petrischale mit 5-6 ml Medium oder in eine T25-Flasche aufgeteilt, indem Sie 5-6 ml pro Flasche zusätzliches Medium hinzufügen.

(also1 T25-Flasche in 2 T25-Flaschen oder 2 6 cm große Petrischalen

Suspendierte ZellenDie Übertragungsschritte sind wie folgt:

1. Halbtauschmethode

Halbtauschbehandlung, vertikale Kultivflasche im KultivraumEtwa eine Stunde, sanft saugen Sie etwa 3 ml Medium, dann 3 ml Medium, wenn das Medium langsam verfärbt, kann direkt etwa 500 ul FBS hinzufügen, kann die Übertragung, wenn Sie direkt 5 ml Medium in zwei Flaschen Kultur, in der Regel kann die Übertragung etwa 3 Mal zentrifugal übertragen, um die toten Zellen zu entfernen.

2. Zentrifugalwechsel

Die Zellsuspension kann bei Abtrennung in ein Zentrifugerrohr gesammelt werden1000rpm， Zentrifugieren Sie 5min, entfernen Sie die Oberreinigung, fügen Sie 1-2 ml Kultur nach der Wiedersuspension und vermischen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 in eine neue T25-Flasche, fügen Sie 6-8 ml eines neuen Mediums hinzu, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um die Wachstumsleistung der Zelle aufrechtzuerhalten, und die nachfolgende Generation erfolgt im Verhältnis von 1: 2 ~ 1: 5 nach den tatsächlichen Umständen.

b undGefrierte Zellen:

1, wenn die Zellen wachsen, um 80% der Fläche der Kulturflasche zu bedecken, werfen Sie die Kulturflüssigkeit in der T25-Flasche ab und waschen Sie die Zellen einmal mit PBS;

2, fügen Sie 0,25% Verdauungsflüssigkeit etwa 1 ml in die Kulturflasche hinzu, beobachten Sie es unter dem umgekehrten Mikroskop, fügen Sie 5 ml Verdauungsflüssigkeit hinzu, um die Verdauung zu beenden, und schlagen Sie die Zellen leicht ab, dann übertragen Sie die Suspension in ein 15 ml Zentrifugerrohr, 1000 Umdrehungen pro Minute Zentrifuge für 5 Minuten;

3. Entfernen Sie das obere Serum und fügen Sie 1 ml Yagi Bio-serofreie Gefrierflüssigkeit (Warennummer:C7001）， Nach dem Vermischen in das Gefrierrohr hinzufügen.

Gefrorene Zellen direkt in-80 ° C Kühlschrank, wie späterMöchtedie Zellen in einen flüssigen Stickstofftank übertragen,DannNotwendig-80°C KühlschrankMittelSpeichernMehr als 24 StundenNoch einmal.In den flüssigen Stickstofftank übertragen.

C undZellresultation:

1、Entfernen von Zellfrierrohren aus flüssigem Stickstoff (AchtungtragenSchutzMaske) schnell zu setzen. Auftauen in einem 37 ° C Wasserbad, bis es keine Kristalle im Gefrierrohr gibt und die Außenwände des Gefrierrohrs mit 75% Alkohol wischen;

2、Verschieben der Zellen in den Gefrierrohren in die 5ml Medium in 15ml Zentrifugerrohr, 1000rpm Zentrifuge 5min;

3、Entfernen, sedimentieren5 ml Medium resuspendiert, ImpfungbisT25 Kulturflasche,lassenauf37 ℃, 5% CO₂Kultur in Zellkultur;

4、Am nächsten Tag wechseln Sie mit frischem Medium weiter.

Hinweis:Einige Zellen sind nicht fest an der Wand fest, während des Transports kann es leicht zu Zellalfall kommen, was ein normales Phänomen ist. Wenn die Entfernung größer ist, können alle Kulturflüssigkeiten in die Zentrifugerrohre gesammelt werden.1000rpm Zentrifuge 5min,SammelnÜbergangskultur(Später Vergleich)Niederschlag hinzugefügt1-2ml， Sanft schlagen, wieder suspendieren, verdauen nach 1-2 Minuten, 5 ml Medium hinzufügen, um die Reaktion zu beenden. Noch einmal zentrifizieren, die Reinigung abwerfen und 1-2 ml Medium wieder suspendieren. Dann in einem Verhältnis von 1: 2 durchgeführt Flaschenübertragung (zwei T25), das neue Medium zu 5-8 ml / Flasche ergänzen und schließlich 37 ° C, 5% CO₂Zellkultur in einer Zellkultur.