Br.Suis Nukleinsäure-Testkit für Schweine

[Produktname]Schweinebuckthorn(Br.Suis)Nukleinsäure-Testkit

[Verpackungsspezifikationen]50T / Karton

[Produktmethode]Echtzeit-FluoreszenzPCR-Verfahren

Schweinebuckthorn(Br.Suis)Nukleinsäure-Testkit[Hauptbestandteile]

RT-PCR-Reaktion, Hybridase, positive Kontrolle, negative Kontrolle.

[Lagerbedingungen und Gültigkeitsdauer]

LichtschutzUnter -20 ° C aufbewahren, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden, Gültigkeitsdauer von 12 Monaten.

[Anwendungsgeräte]
Mehrkanale Echtzeit-Fluoreszenz-Quantifizierungs-PCR-Messgeräte wie ABI-Serie, Bio-Rad-Serie, Agilent Stratagene MX-Serie, Roche LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, Rotor-Gene-Serie und Hangzhou Bogie-Serie.

[Prüfmethode]

Reagenzverbereitung (Reagenzverbereitungsbereich)

（1) Entfernen Sie das Kit aus dem Kühlschrank, entfernen Sie das für das Experiment erforderliche Reagenz aus dem Kit, schmelzen Sie es vollständig und mischen Sie es und zentrifugieren Sie es sofort, um die an der Rohrwand befestigte Flüssigkeit zu entfernen.

（2) Berechnen Sie die Anzahl der Reaktionen (n), die für das Experiment erforderlich sind, und berechnen Sie die verschiedenen Dosen, die für das Experiment erforderlich sind, basierend auf dem in der folgenden Tabelle dargestellten Reaktionssystem.

n = Anzahl der negativen Kontrollen (1T) + Anzahl der positiven Kontrollen (1T) + Fehlerreserve (1T) + Anzahl der Proben

（3) Fügen Sie das obige Reagenz in ein steriles Zentrifugerrohr hinzu und zentrifizieren Sie es sofort nach vollständiger Mischung. Das Reagenz wird in das PCR-Röhrchen nach 20 µL/Röhrchen aufgeteilt.

（4) Nach dem Abdecken des PCR-Reaktionsrohres wird das PCR-Reaktionsrohr in den Probenbehandlungsbereich übertragen. Die übrigen Reagenzien werden im Kühlschrank unter -20 ° C gefriert.

Probenvorbereitung (Probenbehandlungsbereich)

VerwendenQIAGEN, Roche DNA-Test-Kit für DNA-Test-Kit, die spezifische Bedienung gemäß ihrer Test-Kit-Anleitung.

3. Beispiel

Vorbereitet in den oben genanntenDie verarbeiteten Proben werden jeweils mit 5 µl DNA und einem Endvolumen von 25 µl/Röhrchen in die PCR-Reaktionsröhrchen versehen, nachdem die PCR-Reaktionsdeckel gemischt ist, sofort mit niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert und auf das PCR-Instrument übertragen wird. Die negativen Kontrollen und die positiven Kontrollrohre werden jeweils mit 5 μl negativen Kontrollen oder positiven Kontrollen, die mit dem Kit geliefert werden, mit einem Endvolumen von 25 μl / Röhre versehen und nach dem Mischen des PCR-Reaktionsdeckels sofortig auf ein PCR-Instrument übertragen.

PCR (PCR-Amplified Zone)

（1) Nehmen Sie die bereiten PCR-Röhren in der Probenbehandlungszone, legen Sie sie an die entsprechende Position in der Echtzeit-Fluoreszenz-Quantifizierungs-PCR-Probenschlitze und erfassen Sie die Reihenfolge der Platzierung.

（2) Setzen Sie die Parameter der Nukleinsäure-Amplifikation für die PCR-Amplifikation in der folgenden Tabelle.

Hinweis:Die Fluoreszenz-PCR-Messgeräte der ABI-Serie wählen bei der Einstellung keine ROX-Korrektur und wählen die Löschgruppe None.

Referenzwert (Referenzbereich)

1. Wirksamkeitsbestimmung der Kit:

（1) Positive Kontrolle: Es gibt eine typische S-Verstärkungskurve oder einen Ct-Wert von ≤35.

（2) Negative Kontrolle: Ct-Wert > 38 oder kein Ct-Wert, die Linie ist geradlinig oder leicht schräg, keine exponentielle Wachstumsperiode.

2. Die Probenergebnisse bestimmen:

（1) Positiv: Die Proben haben einen Ct-Wert von ≤35 oder eine deutliche exponentielle Wachstumsperiode.

（Verdächtig: Der Ct-Wert der Probe liegt im Bereich von 35 bis 38. Zu diesem Zeitpunkt sollte die Probe wiederholt getestet werden, wenn das wiederholte Experimentergebnis Ct-Wert noch im Bereich von 35 bis 38 ist und eine offensichtliche exponentielle Wachstumsperiode hat, wird es als positiv bestimmt, sonst als negativ.

（3) Negativ: Die Probe ergab einen Ct-Wert > 38 oder keinen Ct-Wert.

(Einschränkungen der Prüfmethode)

Wenn die Nukleinsäurekonzentration in der Testprobe unter der höchsten in diesem Kit istDie DI-Detektion beschränkt die Wahrscheinlichkeit, dass falsch negative Ergebnisse auftreten.

Diese Kit dient ausschließlich zum vorläufigen Screening der Probe, und die positiven Ergebnisse dieser Kit sollten mit einer Kulturmethode weiter diagnostiziert werden.

[Achtung]

Die Labore, die diese Kit verwenden, sollten streng in Übereinstimmung mit den von den betreffenden Teilen des Landes erlassenen Normen für die Verwaltung von Laboren für Genamplifikationsprüfungen verwaltet werden;

Um zu vermeidenRNA-Abbau, der Probenverarbeitungsprozess sollte unter 0-4 ° C betrieben werden und sofort nach Abschluss des Experiments an Bord getestet werden; Geräteverbrauchsmaterialien, die bei der Probenbehandlung verwendet werden, müssen nukleazyfrei behandelt werden;

Alle regionalen Gegenstände sind speziell bestimmt und dürfen nicht gekreuzt werden, um Verschmutzung zu vermeiden; Nach Abschluss der Prüfung sollte der Arbeitstisch sofort gereinigt werden;

Bei der Absorption der Reaktionsflüssigkeit sollte die Erzeugung von Blasen so weit wie möglich vermieden werden; obenVor dem PCR-Gerät sollten Sie darauf achten, ob die einzelnen Reaktionsrohre dicht abgedeckt sind, um zu vermeiden, dass die Flüssigkeit verdampft und ungenaue Ergebnisse verursacht;

Alle Reagenzien in der Kit sollten vor der Verwendung bei normaler Temperatur vollständig geschmolzen und umgehend zentrifugiert werden;

Die in der Kit enthaltenen negativen und positiven Kontrollen sollten vor der ersten Verwendung vollständig in den Probenvorbereitungsbereich übertragen und separat gelagert werden.

Um Fluoreszenzstörungen zu verhindern, sollte direkter Kontakt mit nackten Händen vermieden werden.die PCR-Reaktionsröhre, und jede Markierung auf der PCR-Reaktionsröhre sollte vermieden werden;

Der Saugkopf, der während der Prüfung verwendet wurde, sollte direkt auf die10% Hypochlorsäure im Abfallbehälter, das Ende der Prüfung der PCR-Reaktionsröhre, nicht geöffnet und nach Sterilisierung mit anderen Abfallgegenständen entsorgt; Arbeitstisch und verschiedene Versuchsmittel sollten regelmäßig mit 10% Hypochlorsäure, 75% Alkohol oder UV-Lampe desinfiziert werden;

9. Die Parameter für die Verstärkung des Instruments müssen in Übereinstimmung mit den einschlägigen Anforderungen dieser Anweisung festgelegt werden; Verschiedene Chargennummern können nicht gemischt werden; und während der Gültigkeitsdauer verwendet werden.