Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF) ELISA Kit

Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF) ELISA Kit

Aufbewahrungsbedingungen und Gültigkeitsdauer

1. Lagerung: 2-8 ° C.

Gültigkeitsdauer: 6 Monate

Experimentelle Prinzipien

Diese Kit bestimmt den Spiegel des Epidermalen Wachstumsfaktors (EGF) in der Probe mit der Dual Antibody Clamping Methode. Mit gereinigten Rinder-Epidermal-Wachstumsfaktor (EGF) Antikörper Paket wird Mikroporenplatte, Festphase-Antikörper hergestellt, in der Reihe der Epidermal-Wachstumsfaktor (EGF) in die Mikroporen des Pakets Monomab, dann mit dem HRP-gekennzeichneten Epidermal-Wachstumsfaktor (EGF) Antikörper gebunden, um einen Antikörper-Antigen-Enzym-basierten Antikörper-Komplex zu bilden, nach gründlichem Waschen der Substrat TMB-Darstellung. TMB wird durch die Katalyse des HRP-Enzyms in Blau und unter der Wirkung der Säure in das endgültige Gelb umgewandelt. Die Farbe ist positiv korreliert mit dem Epidermalwachstumsfaktor (EGF) in der Probe. Messung der Absorption (OD-Werte) mit einem Enzym-Skalierer bei einer Wellenlänge von 450 nm und Berechnung der Konzentration des Epidermalen Wachstumsfaktors (EGF) in der Probe mittels einer Standardkurve.

Zusammensetzung des Kits

130 mal konzentrierte Waschflüssigkeit20 ml x 1 Flasche7Endflüssigkeit6 ml x 1 Flasche

2enzymatische Reagentien6 ml x 1 Flasche8Standardprodukt (1200pg/ml)0,5 ml x 1 Flasche

3Enzym Packung Platte12 Löcher x 8 Stücke9Standardverdünnung1,5 ml x 1 Flasche

4Probeverdünnung6 ml x 1 Flasche10Bedienungsanleitung1 Stück

5Farbstoff A-Flüssigkeit6 ml x 1 Flasche11DichtfilmZwei

6Farbstoff B Flüssigkeit6 ml x 1 / Flasche12Versiegelte BeutelEinen

Betriebsschritte

1.Verdünnung des Standardprodukts: Diese Kit bietet ein Original-Standard-Produkt, das der Benutzer in kleinen Proben verdünnen kann, wie im folgenden Diagramm dargestellt.

600 pg/mlStandard Nr. 5150 μl Original-Standardprodukt mit 150 μl Standardverdünnung

300 pg / mlStandard Nr. 4Standard 5 von 150 μl mit 150 μl Standard-Verdünnung

150 pg / mlStandard Nr. 3Standard Nr. 4 von 150 μl mit 150 μl Standard-Verdünnung

75 pg/mlStandard Nr. 2Standard 3 von 150 μl mit 150 μl Standard-Verdünnung

37,5 pg/mlStandard Nr. 1Standard Nr. 2 von 150 μl mit 150 μl Standard-Verdünnung

2.Probenaufnahme: Setzen Sie jeweils ein leeres Loch (leeres Kontrollloch ohne Proben und Enzym-Standard-Reagentien, die übrigen Schritte sind dieselben), Standardloch und Probenloch. Im Enzym-Standardpaket werden genau 50 μl der Standardprobe auf der Platte geprüft, zuerst 40 μl der Probenverdünnung in das zu messende Probenloch hinzugefügt und dann 10 μl der zu messenden Probe hinzugefügt (die Endverdünnung der Probe ist das 5-fache). Die Probe wird auf den Boden des Enzym-Markierungslochs gelegt, versuchen Sie, die Lochwande nicht zu berühren und schütteln Sie sanft.

3.Temperaturzucht: Verwenden Sie die Dichtplatte nach 37 ° C für 30 Minuten.

4.Zuordnung: 30-mal mit destilliertem Wasser verdünnt

5.Waschen: Vorsichtig entfernen Sie die Folie, entfernen Sie die Flüssigkeit, trocknen Sie, füllen Sie jedes Loch mit Waschflüssigkeit, lassen Sie es nach 30 Sekunden entfernen, so wiederholen Sie es 5 Mal und trocknen Sie.

6.Addition von Enzymen: 50 µl Enzym-Label-Reagenz pro Loch hinzugefügt, mit Ausnahme von leeren Lochen.

7.Wärme: Betrieb und 3.

8.Waschen: Betrieb mit 5.

9.Darstellung: Zuerst A50 μl für jedes Loch, dann B50 μl für jedes Loch, leicht schütteln und mischen, 37 ° C Lichtschutz für 10 Minuten.

10.Beenden: Zu jedem Loch fügen Sie 50 µl Terminationsflüssigkeit hinzu, um die Reaktion zu beenden (zu diesem Zeitpunkt wird blau vertikal gelb).

11.Messung: Zertifizieren Sie die Absorption (OD-Wert) der einzelnen Löcher mit einer Wellenlänge von 450 nm. Die Messung sollte innerhalb von 15 Minuten nach dem Zusatz des Terminals durchgeführt werden.

berechnen

Die Konzentration des Standardobjekts als horizontale Koordinate, der OD-Wert als longitudinale Koordinate, die Standardkurve auf dem Koordinatenpapier zeichnen, die entsprechende Konzentration durch die Standardkurve nach dem OD-Wert der Probe ermitteln; Vielfach verdünnt; Oder berechnen Sie die Gleichung der linearen Regression der Standardkurve mit der Konzentration des Standardstoffs und dem OD-Wert, ersetzen Sie den OD-Wert der Probe durch die Gleichung, berechnen Sie die Probenkonzentration und multiplizieren Sie sie mit dem Verdünnungsveltfachen, das heißt, der tatsächlichen Konzentration der Probe.

Hinweise

1. Die Kit aus der Kühlumgebung zu entfernen, sollte nach Raumtemperatur-Gleichgewicht 15-30 Minuten verwendet werden können, Enzym-Markierungspaket nach dem Öffnen der Platte, wenn es nicht beendet ist, sollte die Platte in einem versiegelten Beutel gelagert werden.

2. Konzentrierte Waschflüssigkeit kann kristallisiert werden, kann bei der Verdünnung im Wasserbad erhitzt werden, während das Waschen das Ergebnis nicht beeinflusst.

Jeder Schritt der Probenahme sollte ein Probenahmer verwenden und seine Genauigkeit regelmäßig korrigieren, um Testfehler zu vermeiden. Eine Probenzeit ist am besten innerhalb von 5 Minuten zu kontrollieren, wenn die Probenanzahl groß ist, wird die Verwendung von Riflen empfohlen.

4. Bitte machen Sie die Standardkurve gleichzeitig bei jeder Messung, am besten komponierte Löcher. Wenn der Gehalt der zu messenden Substanz in der Probe zu hoch ist (der OD-Wert der Probe ist größer als der OD-Wert des ersten Lochs des Standardlochs), verdünnen Sie die Probe zuerst mit einem bestimmten Vielfachen (n-mal) und messen Sie es anschließend mit dem Gesamtverdünnungsvervielfachen (×n×5) bei der Berechnung.

5. Dichtfilm beschränkt sich auf eine einmalige Verwendung, um Kreuzverschmutzung zu vermeiden.

6. Untergrund bitte vor Licht aufbewahren.

7. streng in Übereinstimmung mit der Bedienungsanleitung durchgeführt, müssen die Testergebnisse anhand der enzymatischen Messwerte bestimmt werden.

8. Alle Proben, Waschflüssigkeiten und Abfälle müssen mit Infektionsstoffen behandelt werden.

9．Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF) ELISA KitVerschiedene Komponenten dürfen nicht vermischt werden.