qPCR-Kit für Endogene Acc-Genprobe enthält keine Endogene

qPCR-Kit mit endogenem Acc-Genprobe (ohne endogenen Ginseng)

Medicago sativa Endogenes hemL Gen Probe Realtime PCR Kit (ohne interne Kontrolle)

qPCR-Kit mit endogenem Acc-Genprobe (ohne endogenen Ginseng)Produkte und Merkmale:
Der Benutzer sollte bei der Verwendung des Kits streng den Anforderungen der Anleitung entsprechen, einschließlich der Abnahme, Verarbeitung, Aufbewahrung und Einstellung von Probenbedingungen. Gleichzeitig wird empfohlen, eine negative Kontrolle (z. B. eine Reaktion ohne Vorlage) und eine positive Kontrolle (mit einer positiven Kontroll-DNA, die im Kit zur Verfügung gestellt wird) einzurichten, um zu überwachen, ob Kontaminationen oder andere Anomalien während des Experiments vorhanden sind. Wenn ein positives Ergebnis bei einer negativen Kontrolle oder ein Ct-Wert bei einer positiven Kontrolle deutlich vom normalen Bereich abweicht, ist ein Problem mit dem Experiment und die Ursache muss gefunden und das Experiment erneut durchgeführt werden.Es verfügt über folgende Eigenschaften:

1. Der Benutzer muss nur eine DNA-Vorlage zur Verfügung stellen.

2. Prototype und Sonden sind für eine hohe Analyseempfindlichkeit optimiert und können bis zu 100 Kopien / Reaktion erreichen.

3. Positive Kontrolle zur Erleichterung der Unterscheidung von falschen negativen Proben.

4. Hohe Spezifizität, die Vorläufer sind auf der Grundlage einer hochkonservierten Zone der DNA des Acc-Gens der Inseln konzipiert und reagieren nicht mit anderen DNA.

5. Kann sowohl zur qualitativen als auch zur quantitativen Prüfung verwendet werden. Der lineare Bereich für die Quantifizierung beträgt nicht weniger als 5 Größengruppen.

6. Dieses Produkt ist ausreichend für 50-mal 20 μL-System Sondenfluoreszenz quantitative PCR-Reaktion.

Dieses Produkt darf nur zur wissenschaftlichen Forschung verwendet werden.

Spezifikationen und Zutaten:

Transport und Lagerung:Transport bei niedriger Temperatur, -20 ° C aufbewahrt, die Aufbewahrungsdauer beträgt 12 Monate.
Eigene DNA-Proben.

qPCR-Kit mit endogenem Acc-Genprobe (ohne endogenen Ginseng)Verwendung:
I. Verdünnung der Standardkurvenprobe(Nehmen Sie als Beispiel die sechs 10-fachen Verdünnungen von 10E1-10E6 Kopien/μL). Da die Standardkonzentration sehr hoch ist, müssen die folgenden Verdünnungen in separaten Bereichen durchgeführt werden und die Probe oder andere Bestandteile dieses Kits nicht verschmutzt werden). Um die Stabilität des Produkts zu erhöhen und die Verbreitung von infektiösen Krankheitserregern zu vermeiden, liefert dieses Produkt keine lebenden Proben als positive Kontrolle, sondern nur nicht-infektiöse DNA-Fragmente als positive Kontrolle.

1. Markieren Sie 6 Zentrifugerrohre mit 6, 5, 4, 3, 2 und 1.

2. Fügen Sie jeweils 45 μL fluoreszierende PCR-spezielle Schablonenverdünnung mit einem Kernpistolkopf hinzu, am besten mit einem Kernpistolkopf, unten).

3. Fügen Sie 5 μL 1 x 10E7 Kopie/μL positiver Kontrolle (Kit zur Verfügung gestellt) in Röhre 6 und schocken Sie für 1 Minute vollständig, um 1 x 10E6 Kopie/μL Standardkurve Probe zu erhalten. Auf Eis setzen.

4. Wechseln Sie den Pistolenkopf, fügen Sie 5 μL 1 x 10E6-Kopie/μL positiver Kontroll (von der vorherigen Verdünnung) in die Röhre 5 und schütteln Sie vollständig für 1 Minute, um eine Standardkurve von 1 x 10E5-Kopie/μL zu erhalten. Auf Eis setzen.

5. Wechseln Sie den Pistolenkopf, fügen Sie 5 μL 1 x 10E5 Kopie / μL positiver Kontroll (von der vorherigen Verdünnung) in die Röhre 4 und schütteln Sie vollständig für 1 Minute, um eine Standardkurve von 1 x 10E4 Kopie / μL zu erhalten. Auf Eis setzen.

6. Wiederholen Sie den obigen Vorgang, bis Sie eine Standardkurvenprobe mit 6 Verdünnungsgraden erhalten haben. Auf Eis setzen.

Vorbereitung der DNA-Probe

Wenn es N Proben gibt, ist es am besten, N + 2 Extraktionen einzustellen, von denen eine PC (Probenbereitung für positive Kontrolle) und eine NC (Probenbereitung für negative Kontrolle) ist. Mit 10 µL der zuvor erhaltenen Verdünnung Nr. 4 und einer bestimmten Menge Wasser kann das Gesamtvolumen das gleiche wie das Anfangsvolumen für jede Zubereitung verwendet werden.

PC. Auch Wasser als NC.

8. Reinigen Sie die DNA der Probe mit Ihrer Wahl, diese Kit ist kompatibel mit den meisten Proben-DNA-Extraktion-Kits auf dem Markt. Es ist auch möglich, ein extraktionsfreies Nukleinsäurefreisetzungsmittel unseres Unternehmens zu kaufen.

Probe qPCR-Reaktion (20 μL-System, im Probenvorbereitungsraum durchgeführt)

Wenn eine quantitative Analyse durchgeführt wird und nur eine Wiederholung durchgeführt wird, markieren Sie N + 9 PCR-Röhrchen, davon N + 2

Die oben erhaltenen N+2 Proben, eine für die PCR-negative Kontrolle (mit Wasser als Schablone) und sechs für die Standardkurven. Wenn eine qualitative Analyse durchgeführt wird und nur eine Wiederholung durchgeführt wird, werden N+4 PCR-Röhre markiert, von denen N+2 für die zuvor erhaltenen N+2-Proben, 1 für die PCR-negative Kontrolle (mit Wasser als Vorlage) und 1 für die PCR-positive Kontrolle (direkt mit der positiven Kontrollverdünnung von Schritt 6, Röhre 4 als Vorlage). Im Folgenden werden die Schritte nur als Beispiele für die quantitative Analyse beschrieben.

10. Drücken Sie die Tabelle unten, um die einzelnen Zutaten in der Markierungsröhre hinzuzufügen(In dieser Tabelle ist nur eine Wiederholung aufgeführt. Die positive Kontrolle wird erst festgelegt, wenn das Probenrohr und die negative Kontrolle eingestellt sind, und die positive Kontrolle wird erst hinzugefügt, bis alle Proben auf dem Deckel gelagert sind):

11. Nachdem Sie den Deckel abgedeckt haben, fahren Sie nach folgenden Parametern PCR durch:

4. Datenverarbeitung

12. Wenn diese Kit zur quantitativen Prüfung verwendet wird, wird die Standardkurve mit dem Logwert der positiven Kontrollkonzentration als Querachse und dem Ct-Wert als Vertikalachse gezeichnet. Dann wird der Ct-Wert der Probe aus der Standardkurve berechnet, um den Logwert der DNA-Konzentration der Probe zu berechnen.

Wenn diese Kit zur qualitativen Prüfung verwendet wird und nur positiv oder negativ bestimmt wird, muss der Ct der negativen Kontrolle keinen numerischen Wert haben oder der Ct-Wert gleich oder größer als 40 sein. Positive Kontrollen müssen Fluoreszenz-Logarithmus-Wachstum haben, eine typische Amplifikationskurve haben und Ct-Werte sollten kleiner als 40 sein. Die Probe wird positiv behandelt, wenn ihr Ct kleiner als 40 ist. Wenn kein Ct-Wert oder größer oder gleich 40 ist, ist es negativ.
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