Flüssigchromatografie Säulen

Flüssigchromatografie Säulen

Das System des Flüssigkeits-Chromatometers besteht aus mehreren Teilen wie Speichern, Pumpen, Probeneinsatzgeräten, Chromatografie-Säulen, Detektoren, Loggeräten und anderen. Die Flussphase im Speicherbehälter wird durch eine Hochdruckpumpe in das System eingebracht, die Probenlösung wird durch den Probeneinsatzer in die Flussphase geladen und in die Chromatospektroskopale (Fixphase) geladen, da die einzelnen Komponenten der Probenlösung in zwei Phasen unterschiedliche Verteilungskoeffizienten haben, während die relative Bewegung in beiden Phasen erfolgt, nach wiederholten adsorption-deabsorption-Verteilungsprozessen erzeugt jede Komponente einen großen Unterschied in der Bewegungsgeschwindigkeit, wird in einzelne Komponenten getrennt, die in der Folge aus der Säule fließen, wenn die Probenkonzentration durch den Detektor in ein elektrisches Signal umgewandelt wird, das an den Aufzeichner gesendet wird, und die Daten werden in Diagrammform gedruckt.

Grundsatzstruktur

[1] Struktur der Flüssigchromatografie:

a 、 Leere Säulen bestehen aus Säulenverbindungen, Säulenrohren und Filtern

Die Säulenverbindung verwendet eine Struktur mit niedrigem Totvolumen, die Säulenverbindung ist eine Gewindekomponente mit beiden Enden, ein Ende ist ein 7/16-Zoll-Innengewinde, das andere Ende ist ein 3/16-Zoll-Innengewinde (in- und ausländisch normalisiert). Ein 7/16-Zoll-Innengewinde ist mit einem 1/4-Zoll-Zylinderrohr (Φ6,35 mm) verbunden, wobei ein in der Mitte platzierter Druckring zur Dichtung verwendet wird. Ein 3/16-Zoll-Innengewinde ist mit einem 1/16-Zoll-Verbindungsrohr (Φ1,57 mm) verbunden und in der Mitte ist ein Druckring zur Abdichtung der Säulenverbindungen angebracht. Um das außerhalb der Säule sterbende Volumen zu minimieren, bei der Installation der Chromatografie Säule, mit Φ1,57 mm Anschlussrohr nach dem Druck durch einen hohlen Schraubenring möglichst nach unten stecken und dann die hohle Schraube festhalten. Der Druckring wird durch eine hohle Schraube gedrückt Verformung der hinteren Spannringe auf dem Verbindungsrohr (die offene Rohrlänge des Verbindungsrohres nach dem Durchlaufen des Druckrings sollte streng auf 2. 5 mm Länge oder andere feste Größe).

Innerhalb der beiden Enden der Säulenverbindung ist ein Edelstahlfilter (oder ein Filternetz) an beiden Enden des Säulenrohres platziert, um die Säulenfüllung zu blockieren, die nicht aus der Säule herausfließt und verloren geht. Jede leere Säule besteht aus 316L Edelstahl und kann den allgemeinen Lösungsmittelwirkungen standhalten. Da jedoch das Lösungsmittel, das Chlorid enthält, eine gewisse Korrosionsfähigkeit hat, sollte bei der Verwendung beachtet werden, dass solche Lösungsmittel nicht lange in den Säulen und Verbindungsrohren bleiben können, um Korrosion zu vermeiden.

b 、 Säulenfüllung:

Die Trennung der Flüssigchromatografie-Säulen erfolgt zwischen Füllstoff und Flussphase, und die Klassifizierung der Säulen hängt von der Füllstoffart ab. Phasensäulen: Viele Silikon als Säulenfüllung. Abhängig von der Form kann in amorphose und kugelförmige Typen unterteilt werden, deren Partikeldurchmesser im Bereich von 3 bis 10 μm liegt. Eine andere Art von orthophasen Füllstoffe ist Silikon-Oberflächenbindung - CN, -NH2 und andere funktionelle Gruppen, die sogenannte Bindungsphase Silikon. Gegenphasensäulen: hauptsächlich auf Silikon als Matrix, die an ihrer Oberfläche nicht-polare Füllstoffe mit Octalalkylfunktionellen Gruppen (ODS) binden. Es gibt auch keine Unterschiede zwischen Typen und Ballen.

Andere häufig verwendete Gegenphasenfüllstoffe binden C8, C4, C2, Phenyl usw., deren Partikelgröße zwischen 3 und 10 μm liegt. Anforderungen an Füllstoffe

Die häufig verwendeten chromatografischen Säulenfüllstoffe sind chemisch gebundene Silikonen. Reverse-Phase-Chromatographie-Systeme verwenden nicht-polare Füllstoffe, die häufig mit Octalkyl-Silikon-Bindungssilikon verwendet werden, Octyl-Silikon-Bindungssilikon und andere Arten von Silikon-Bindungssilikon (wie Cyan-Bindungssilikon und Amino-Bindungssilikon usw.) sind auch verwendet. Orthophasisches Chromatografiesystem verwendet polare Füllstoffe, häufig verwendete Füllstoffe sind Silikon usw. Ionen-Austausch-Chromatografie-System mit Ionen-Austausch-Füllstoffe; Molekulares Blockierungschromatografiesystem mit Füllstoffen wie Gelen oder polymeren porösen Mikrosphären; Die Isomeren werden in der Regel mit manuellen Füllstoffen getrennt.

Die Eigenschaften des Füllmittels (wie Form des Trägers, Teilchengröße, Durchmesser, Oberflächenfläche, Oberflächenabdeckung der Bindungsgruppen, Kohlenstoffgehalt und Bindungstyp usw.) sowie die Füllung der Chromatografie-Säulen beeinflussen direkt das Retentionsverhalten und die Trennungseffekte der Probe. Füllstoffe mit einer Apertur unter 15 nm (1 nm = 10 Å) eignen sich für die Analyse von Verbindungen mit einem Molekulargewicht von weniger als 2000, und Verbindungen mit einem Molekulargewicht von mehr als 2000 sollten Füllstoffe mit einer Apertur über 30 nm wählen. Sofern nicht anders vorgesehen, ist die Füllstoffpartikelgröße der Analysezüste in der Regel

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zwischen 3 μm und 10 μm. Füllstoffe mit kleineren Partikelgrößen (ca. 2 μm) werden häufig zum Füllen von Mikrosäulen (Innendurchmesser ca. 2 mm) verwendet, bei der Verwendung von Mikrosäulen muss die Leistung der Infusionspumpe, das Probenvolumen, das Erkennungsvolumen des Beckens und das Totvolumen des Systems entsprechend sein; Bei Bedarf müssen auch die chromatischen Bedingungen angemessen angepasst werden. Bei Streitigkeiten über die Ergebnisse der Bestimmung haben die Ergebnisse der Bestimmung der im Körper der Sorte festgelegten chromatografischen Bedingungen Vorrang.

Temperaturanforderungen

Die Gebrauchstemperatur der normalen Bindungsphase mit Silikon als Träger übersteigt in der Regel nicht 35 ° C, um den Trenneiffekt zu verbessern, kann die Gebrauchstemperatur der Chromatoskomponente angemessen erhöht werden, aber nicht mehr als 60 ° C.

Anforderungen an die Flussphase

Der pH-Wert der Flussphase sollte zwischen 2 und 8 liegen. Bei einem pH-Wert größer als 8 kann das Trägersilikol gelöst werden; Wenn der pH-Wert unter 2 liegt, wird die chemische Bindung an Silikon leicht hydrolysiert. Wenn in einem Chromatografiesystem eine Flussphase mit einem pH-Wert größer als 8 verwendet werden muss, sollten alkalibeständige Füllstoffe verwendet werden, wie bindende Silikonfüllstoffe mit hochreinem Silikon als Träger und hoher Oberflächenbedeckung, überdeckte Polymerfüllstoffe, organisch-anorganische Hybridisierungsfüllstoffe oder nicht-Silikonfüllstoffe; Wenn eine Flussphase mit einem pH-Wert kleiner als 2 verwendet werden muss, sollten säurebeständige Füllstoffe wie Isopropyl- oder Isobutyl-Füllstoffe mit großen Seitenketten verwendet werden, die eine räumliche Bit-Resistenz-Wirkung erzeugen können.

Hinweise

Chromatografie Säulen Effekt und Schutzsäulen

Wenn Sie eine neue Säule bekommen, müssen Sie sich zuerst die Anleitung ansehen, dann die Säulenwirkung messen, die Säulenwirkung regelmäßig überprüfen, das auf der neuen Chromatografie gewonnene Chromatogramm aufbewahren und die Bedingungen aufzeichnen, um die Spektralbandbreite des Instruments regelmäßig zu überprüfen. Bei Anwendungen zur Online-Überwachung sollten die Chromatografie-Säulen physikalischen und chemischen Online-Schutz bieten, z. B. durch die Installation von Online-Filtern, selbstmontierten Füllstoff-Schutzsäulen und vormontierten Schutzsäulen. Die Rolle des Online-Filters ist es, die Akkumulation von Partikeln im Zylinderkopf zu verhindern, der Vorteil ist, dass die Säulenwirkung im Grunde nicht beeinflusst wird, wenn eine hohe Säulenwirkung erforderlich ist, wird häufig verwendet, die Verbrauchsgüter werden oft ersetzt, die Filterelemente und die Rolle der Dichtungsschutzsäule ist es, die Säulen vor chemischer Verschmutzung zu schützen. Der Nachteil ist, dass die meisten Schutzsäulen die Säulenwirkung der Chromatografie-Säulen beeinflussen, insbesondere bei der Verwendung von Mikrosäulen, die häufig gewöhnliche Selbstfüllstoff-Schutzsäulen verwendet werden. Einige neue Schutzsäulen wie S e n t r y g u a r d Schutzsäulen, die sich durch hohe Qualität, effiziente Füllstoffe, erhöhte Analyse der Säulenwirkung, große Belastungskapazität für schmutzige Proben auszeichnen haben, können die Lebensdauer der Schutzsäulen verlängern, können die Verbindungen mit der Hand verschraubt werden, benötigen keine Werkzeuge bei der Installation, sparen Sie Zeit, können Sie eine Vielzahl von verschiedenen Füllstoffen verwenden, die hauptsächlich für sehr schmutzige, sehr komplexe Probenboden wie biochemische Proben, Umweltproben und Lebensmittel verwendet werden, oder möchten nicht zu viel Gartenphasenextraktion tun, wollen nicht den Säuleneffekt verringern.

Reinigung der chromatografischen Säulen

Um das vollständige Verständnis der gemachten Probe zu haben, mit der Stromphase zu reinigen, die die Probe zu waschen Fähigkeit zui stark, für die Silikonsäule, zuerst mit Methanol zu waschen, um die polaren Verunreinigungen zu entfernen, dann mit getrocknetem Dichlormethan und positivem Heptan 1 0 - 2 0 O r aL aktiviert, für Bindungen und Phasensäulen, in der Regel mit Methanol und Methanol und Wasser gespült, jede Spektroskolonne hat eine spezifische Reinigungsmethode, achten Sie darauf, ihre Gebrauchsanweisungen zu lesen

Lagerung der Chromatografie-Säulen

Entfernen Sie vor der Lagerung Verunreinigungen und Salze, verwenden Sie ein geeignetes Lagerlösungsmittel, vermeiden Sie die Trocknung des Chromatografiebetts, vermeiden Sie mechanische Vibrationen, verhindern Sie das Bakterienwachstum und achten Sie auf die Lagertemperatur.

Fehlerbehebung

1. Zu hoher Säulendruck

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Vielleicht sind Partikel verstopft. Ausdehnung des Säulenbettes, irreversible Adsorption, Bakterienwachstum usw. verursacht. Es können auch Probleme mit dem Gegendruck des Systems sein, wie z. B. Verstopfungen von Dämpfern, Verstopfungen von Probenmessern, Verstopfungen von Rohrleitungen oder Anschlüssen. Online-Filter sind nicht sauber, Drucksensoren sind nicht genau usw.

2. Niedrige Säulenwirkung

Es kann sein, dass die Spektroskolonne kontaminiert ist, der Filter teilweise verstopft ist, das tote Volumen in der Spektroskolonne verursacht wird, z. B. der Flussphase-p-H-Wert oder eine ungeeignete Zusammensetzung verursacht einen Fixtphasenverlust. Eine drastische Veränderung der Flussphase verursacht physikalische Schäden an der Festphase, mechanische Vibrationen verursachen Risse in der Festphase, Schrumpfung oder Trocknung des Säulenbettes.

Es kann auch ein Problem mit der Verbindung der Instrumente sein, sorgfältig überprüfen Sie, ob die Probenahme, der Detektor, die Rohrleitung, die Schutzsäule und die Online-Filter etc. gut verbunden sind, oder es kann ein Problem sein, dass die Chromatografie-Säule nicht gut ausgewogen ist und die Probenahme zu groß ist.

3, schlechte Wiederholbarkeit, keine Spitze, niedrige Recyclingrate

Es kann sein, dass die Chromatografie-Säule kontaminiert ist, der Flussphase-p-H-Wert oder die ungeeignete Zusammensetzung zu einem Fixtphasenverlust führt, das Probenlösungsmittel anders ist oder die Probe selbst instabil ist, die Fixtphase-Polarität zu stark oder die Flussphase-Polarität zu schwach ist. Oder nicht spezifische Adsorption. Es kann auch sein, dass die Gleichgewichtszeit beim Gradientexperiment unzureichend ist, Temperaturschwankungen, Änderungen der Flussphasenzusammensetzung, unterschiedliche Probenlösungsmittel, schlechte Probenstabilität, schlechte Methodenentwicklung, ungeeignete Säure- und Alkalinität des Puffers oder eine mangelnde Pufferkapazität.

Bis keine Blasen in der Leitung (von der Lösungsmittelflasche bis zum Pumpeneingang) vorhanden sind, setzen Sie den Schaltkanal so lange fort, bis alle zu verwendenden Kanäle blasenfrei sind.

Klicken Sie auf das Pumpensymbol, das Menü Parametereinstellungen erscheint, klicken Sie auf die Pumpensteuerungsoption, wählen Sie Off aus, klicken Sie auf Ok, um die Pumpe auszuschalten und das Reinigungsventil zu schließen.

11. Klicken Sie auf das Pumpensymbol, das Menü für die Einstellung der Parameter erscheint, klicken Sie auf die Pumpe-Option Setup, gelangen Sie zum Pumpenbewertungsbildschirm und setzen Sie den Durchfluss: 1,0 ml/min ein.

Klicken Sie auf das Flaschensymbol unter der Pumpe, wie in der Abbildung gezeigt (mit einer binären Pumpe zum Beispiel), um das tatsächliche Volumen des Lösungsmittels und das Flaschenvolumen einzugeben. Auch das Volumen der Stillpumpe kann eingegeben werden. Klicken Sie auf OK