Hintergrund

Grund-negative Bakterien (GNB) verursachen eines der größten Probleme der öffentlichen Gesundheit weltweit, da diese Bakterien eine hohe Resistenz gegen Antibiotika1 aufweisen und infektiöse Erkrankungen wie Lungenentzündung, Blutinfektionen, Wunden und chirurgische Ortsinfektionen sowie Meningitis auslösen2. Bakterielle Endotoxine sind ein wichtiger Bestandteil der GNB-Zellmembran und lösen bei ausreichend hohen Konzentrationen eine thermische Reaktion (d. h. hohes Fieber) aus. Die US-amerikanische Food and Drug Administration (FDA) verlangt von Pharmafabriken, eine bakterielle Endotoxinprüfung (BET) durchzuführen, die sich auf die Messung des GNB-Verschmutzungsgrades von Injektionswasser (WFI), pharmazeutischen Rohstoffen, fertigen Medikamenten und medizinischen Geräten konzentriert. Es gibt drei Methoden zur Detektion von Endotoxinen: 1. Gel-Clot-Methode, 2. Kinetic Turbidimetric Assay (KTA) und 3. Kinetic Chromogenic Assay (KCA).

Limulus Amebocyte Lysate (LAL) extrahiert das Blut aus der Limulus Amebocyte zur Untersuchung von endobakteriellen Toxinen. Wenn Endotoxine erkannt werden, wird eine Reihe von enzymatischen Reaktionen in der Kaskade des Reagents aufgetreten, die die Erscheinung von Endotoxinen verstärken. Wenn Endotoxine mit einem Antigen reagieren, aktivieren sie den ersten Faktor in der Enzymkaskade, den C-Faktor, und dann den B-Faktor. Der B-Faktor wirkt auf das Kogulationsenzym und macht es zu einem Kogulationsenzym. Der letzte Prüfschritt ist die Kondensation (mit Gel), Trübung (mit dynamischer Trübung) oder Farbdesignation (mit dynamischer Farbdesignation).

Sievers Eclipse Endotoxindetektor für Bakterien

Der Eclipse-Detektor besteht aus drei Teilen: Instrument, Mikrofluidplatte und Software. Das Instrument ist ein Absorptionsanalyser mit 37°C thermostatischer Kultivsteuerung und Zentrifugtechnologie. In der Mikroporenplatte sind Referenzstandard-Endotoxin (RSE) und Positive Product Controls (PPC) vorgegeben, so dass der Benutzer eine Standardkurve von bis zu 5 Punkten (Konzentrationen von 50-0,005 EU/ml) und bis zu 21 Proben sowie negative und positive Kontrollen pro Test durchführen kann. Die Eclipse-Software ist einfach zu bedienen und entspricht 21 CFR Part 11.

Zweck und Umfang

Der LAL-Test ist anfällig für Störungen. Die Proben können Substanzen enthalten, die die Endotoxindetektion hemmen oder verstärken, wodurch falsche Ergebnisse erzielt werden. Die Proben werden durch Methodenauigkeitstests und Inhibitions-/Verstärkungstests behandelt, um die Verdünnungsmethoden (oder andere wirksame Methoden) zu bestimmen, die zur Überwindung der oben genannten Störungen erforderlich sind.

Diese Anwendungsliteratur beschreibt, wie ein Inhibition-/Verstärkungstest durchgeführt wird, wie dieser Test ausgeführt wird, um die Anwendbarkeit des Sievers Eclipse-Endotoxindetektors zu demonstrieren, sowie die Anwendbarkeit einer Methode zur Ausführung von Proben. Methodeninformationen umfassen die verwendeten Reagenzverfahren, die Testempfindlichkeit (λ), das verifizierte Verdünnungsmultipal, die PPC-Konzentration (positive Produktkontrolle), das Verdünnungsmittel, die %CV-Kriterien und die durchschnittliche PPC-Rückgewinnungsrate.

Die Probeninformationen umfassen: die Probenkonzentration (in mg/ml), die Endotoxingrenzwerte (EL, Endotoxingrenzwerte; in EU/ml), die maximal gültige Verdünnung (MVD, Maximum Valid Dilution), die minimal gültige Konzentration (MVC, Minimum Valid Concentration), das durchschnittliche Probenergebnis (in EU/ml) und die Lager-/Behandlungsbedingungen der Probe.

Sievers Eclipse Endotoxindetektor: eine effektive und praktische Lösung

Der Sievers Eclipse Endotoxindetektor ermöglicht die effiziente Durchführung von Unterdrückungs-/Verstärkungstests sowie der oben genannten 3-Batch-Produktvalidierungsverfahren. Dieser Detektor vereinfacht die Endotoxinerkennung durch fortschrittliche Zentrifugtechnik und dynamische Methoden. Diese Vorteile ermöglichen es diesem Tester, Testergebnisse schneller und präziser zu melden und präzise quantitative und störende Analysen zu liefern.

Zu den Vorteilen des Sievers Eclipse-Detektors gehören:

• Effizient: Die Automatisierungsfunktion reduziert die Betriebsschritte bei der Testeinstellung und Pipettierung und erhöht den Durchfluss.

• Intuitiv: Die intuitive Benutzeroberfläche vereinfacht die Betriebsschritte, reduziert Fehler und verbessert die Datenqualität.

• Konformität: Dieser Tester erfüllt strenge gesetzliche Anforderungen an pharmakologische Tests und Datenzuverlässigkeit.

Der Sievers Eclipse Endotoxindetektor ist ein wichtiger technologischer Fortschritt im Bereich der Endotoxindetektion und bietet umfassende, effiziente und konforme Lösungen für die laufenden Anforderungen an Produktvalidierung, die die Sicherheit und Qualität der Produkte verbessern.

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