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Das Flüssigchromatogramm (HPLC) ist eines der am häufigsten verwendeten Testinstrumente im Analyselabor und wird immer häufiger eingesetzt. Während der Verwendung eines solchen Instruments entstehen unvermeidlich eine Vielzahl von Problemen, die sich direkt auf die Genauigkeit der gemessenen Daten und die ordnungsgemäße Funktion des Instruments auswirken. Wenn der Bediener die Ursache des Fehlers verstehen kann, kann er die Methoden zur Verhütung und Beseitigung dieser Fehler eindeutig verstehen, das Instrument richtig verwenden und die Leistung des Instruments maximieren. Heute teilen wir mit Ihnen einige Fragen, die Sie bei der Verwendung von Flüssigchromatogrammen beachten sollten.

Komponentenanalyse | Oberflächenanalyse | Vorbehandlungssystem | Oberflächenanalyse | Härteprüfung | Mechanische Prüfung | Standardproben

1. Probleme mit der Verwendung von Teströhren

1. Reinigung der Probe. Die Flüssigchromatografie ist eine sehr empfindliche Analysemethode, die die Genauigkeit der Testergebnisse beeinflussen kann, wenn ein unreiniges Röhrchen verwendet wird. Zum Beispiel bei der Verwendung von Methanol als Lösungsmittel, um die Probe zu lösen, wird das kleine Prüfrohr mit Gummistopfen zum Abdecken verwendet, daher gibt es bei jedem Prüfeingang eine Retentionszeit festgelegte Störungsspitze, nachdem bestätigt wurde, dass dieser Störungsspitze durch Methanol eingetauchte Gummistopfen und gelöste Komponente erzeugt wird, nach dem Austausch durch Glas-Prüfrohr wird der Störungsspitze beseitigt.

2, das Problem der Lösung von Kunststoff-Prüfrohren. In den letzten Jahren, Einweg-Kunststoff-Prüfrohr für die Tester eine große Bequemlichkeit, aber im Prozess der Verwendung ist es notwendig, die Auflösung von organischen Lösungsmitteln auf das Prüfrohr zu beachten, wenn diese Art von Prüfrohr, um Proben zu extrahieren, einige organische Lösungsmittel (wie lvfang usw.) auf die Rohrwand aufgelöst sind, können diese aufgelösten Stoffe manchmal auch ein Signal auf dem Detektor erzeugen, um die Probenbestätigung zu stören. Zu diesem Zeitpunkt können die gleichen experimentellen Bedingungen testen, um zu sehen, ob der Extrakt auf dem Detektor Störsignale erzeugen kann, wenn es Störsignale gibt, kann man nur ein Glas-Prüfrohr mit organischen Lösungsmitteln ersetzen.

3, das Problem der Adsorption der getesteten Probe an der Prüfröhrwand. Dieses Problem sollte auch auf die Aufmerksamkeit gezogen werden, sonst wird es auch die Genauigkeit der Testergebnisse beeinflussen, in der Therapeutischen Drogenüberwachung (TDM), einige getestete Medikamente wie Amitriplin, Promyazin und andere leicht an der Glasrohrwand adsorbiert werden, daher ist es ratsam, Polypropylenröhre in der Operation zu verwenden, um das Auftreten von Adsorptionsphänomenen in der Extraktion zu verhindern, kann 0,5% der Diamid-Alkan-Flüssigkeit als Extraktionsmittel verwendet werden, um die Adsorption effektiv zu verhindern.

II. Probleme mit dem Betrieb des Probenventils

Derzeit ist das häufig verwendete Probeneinsatzventil im analytischen Flüssigkeitsspektrometer das Probeneinsatzventil des Typs 7725, dessen innere Sechskanalventilstruktur den Probeneinsatzbetrieb sehr bequem macht, aber wenn es falsch verwendet wird, kann es auch Probleme verursachen. Zum Beispiel während der Versuche mit Flüssigchromatographie kann es manchmal abweichende Spitzen der Chromatographie und ein Problem mit schlechter Reproduzierbarkeit geben, das hauptsächlich auf falsche Betriebsmethoden zurückzuführen ist, um solche Probleme zu lösen, müssen Sie mit den folgenden Aspekten beginnen.

1. Kontrolle der Probenmenge. Bei der Probeingabe mit dem Probenventil ist der Probenring im Ventil quantitativ (das Volumen des Probenrings des allgemeinen analytischen Probenventils beträgt 20 µl), da die Probenlösung, die in das Probenventil injiziert wird, in der Rohrleitung des Probenrings einen radialen Geschwindigkeitsgradienten hat (d. h. die Flüssigkeitsströmungsgeschwindigkeit an der Rohrwand ist schneller). Um daher den Probenring mit der Probenlösung zu füllen und somit das Eingangsventil zu verwenden, um genau zu quantifizieren, muss die Eingangsmenge des Probenrings doppelt so groß sein wie das Volumen des Probenrings. Wenn eine Spritze verwendet wird, um die Eingangsmenge zu kontrollieren, kann Zui nur eine Menge von 1/2 des Ringvolumens der Probe injizieren, um zu verhindern, dass einige Proben durch das Überströmungsrohr überlaufen, was zu Fehlern in der quantitativen Analyse führt.

2. Reinigungsprobleme des Eingangsventils. Wenn die Probe im Probenring zum letzten Mal eingegeben ist, wird die Probe bei der nächsten Injektion unvermeidlich kontaminiert werden, um das Auftreten dieses Phänomens zu verhindern, sollten Sie die folgenden Schritte befolgen: a. Das Probenventil hat 2 Positionen, INJECT und LOAD. Zunächst in der LAAD-Position, mit der Spritze, um die Flussphase in das Probenventil ein paar Male zu reinigen, jede Dosis von etwa 40ul; b. dann, wenn die Probenventilplatte in die INJECT-Position gezogen wird, dann in der Flussphase ein paar Male zu reinigen, jede Dosis ist noch 40ul; c.zui, dann spritzen Sie die Probe in das Probenventil.

Durch die Befolgung der oben genannten Schritte können Verschmutzungen durch das Probeneinsatzventil vermieden werden, wodurch Störspitzen beseitigt und die Genauigkeit der Analyseergebnisse verbessert werden.

3, Verstopfung des Einlaufventils. Manchmal wird das Überströmungsrohr des Eingangsventils verstopft und die Injektionsnadel kann sich nicht bewegen, wenn die Probe in das Eingangsventil injiziert wird. Dieser Fehler ist auf eine Verstopfung des Überflussrohres zurückzuführen. Die Ursache der Verstopfung ist hauptsächlich darauf zurückzuführen, dass die gelöste Probe durch eine Salzlösung fließt, die am Entleerungsanschluss des Überflussrohres kristallisiert wird. Zu diesem Zeitpunkt kann ein kleiner Becher mit einer kleinen Menge destilliertem Wasser in die Überflussrohröffnung eingetaucht werden, und der Kristall des Salzes am Hafen kann aufgelöst werden, um Fehler zu beheben. Dieser Fehler kann vermieden werden, wenn nach jedem Ablauf der Probenaufnahme wiederholt mit destilliertem Wasser gespült wird, um das Salz im Überflussrohr vollständig abzuspülen.

Die mobile Phase (MOBLE PHASE)

Methanol und Acenitril werden häufig in der Flüssigchromatographie zur Herstellung von Flussphasen verwendet. Die häufig verwendeten Reagenzien in der Flüssigchromatographie sind hochwertige Reagenzien wie reine Reagenzien für die Chromatographie. Wenn die Anforderungen weniger streng sind, können auch hochreine oder analytische Reinstoffe verwendet werden. In der Flüssigchromatografie werden UV-Detektoren häufig verwendet, daher sollten aus der Sicht der Verringerung des Grundgeräuschs und der Verbesserung der Analyseempfindlichkeit ein UV-reines chromatografisches Reagenz verwendet werden, das kleine und geringe Verunreinigungen absorbiert.

1. Filterung der Flussphase. Vor der Verwendung muss eine fertige Flussphase zuerst mit einem Mikroporenfilterfilm mit einem Durchmesser von 0,5 um gefiltert werden. Dies liegt daran, dass die Lösung viele kleine Partikel enthält, die mit dem bloßen Auge schwer zu erkennen sind, wenn sie nicht entfernt werden, wird die Pumpenmündung und der Filter auf dem Zylinderkopf verstopft, so dass der normale Kanal der Flussphase verstopft wird, so dass der Widerstand der Chromatografie-Säule erhöht wird, der Säulendruck steigt und die Säulenwirkung sinkt. Wenn dies passiert, wechseln Sie durch eine gefilterte Flussphase und entfernen Sie den verstopften Filter und einweichen Sie ihn 20 Minuten lang mit einer Ultraschallreiniger in einer 20%igen Wasserlösung mit Sticksäure, um Verstopfungen auf dem Filter zu entfernen.

2. Entgasung der Flussphase. Die Flussphase muss vor der Verwendung entgasset werden, um das in der Flussphase aufgelöste Gas so weit wie möglich zu entfernen, sonst verringern diese Gase die Leistung der Säulenfüllung und können das Signal des Detektors stark stören. Es gibt eine Vielzahl von Methoden zur Entgassung, wie Ultraschall-Entgassung, Vakuumtentgassung und Stickstoffentgassung. Die Vakuumtentgasungsmethode und die Stickstoffströmungsentgasungsmethode sind die derzeit häufig verwendeten Entgasungsmethoden. Nach der Mischung von Wasser und Methanol wird eine große Menge an Blasen erzeugt, die, wenn sie nicht entgasset werden, in die Chromatografie und den Detektor gelangen und den normalen Ablauf der Analysearbeit beeinflussen.

Verwendung und Wartung der Chromatografie

Die Chromatografie-Säule ist der Hauptbestandteil des Flüssigkeits-Chromatogramms, ob der gemessene Stoff gut getrennt und bestimmt werden kann, und die Leistung der Chromatografie-Säule spielt eine entscheidende Rolle. Daher sollte bei der täglichen Arbeit besondere Aufmerksamkeit auf die richtige Verwendung und Wartung der Chromatografie gelegt werden, um die Lebensdauer der Chromatografie zu verlängern.

1. Verwendung von Vorsäulen und Schutzsäulen. Die Pre-Column, die zwischen der Pumpe und dem Probeneinsatzer installiert ist, sorgt für ein Gleichgewicht* der Flussphase in der Chromatokollonne und verhindert, dass Komponenten oder Schadstoffe, die die Kolonnenfüllung zerstören, in die Chromatokollonne gelangen. Die Schutzsäule (Guard Column) kann verhindern, dass Komponenten, die fest an der Chromatografie-Säule befestigt werden können, in die Chromatografie-Säule gelangen, und die Schutzsäule sollte dieselbe sein wie die Füllstoffe der Chromatografie-Säule. Vor- und Schutzsäulen können häufig ausgetauscht werden, ohne dass die Chromatografie häufig ausgetauscht werden muss, was die Lebensdauer der Chromatografie verlängert.

2. Verhindern Sie, dass Gase in die Chromatografie eintreten. Einige Chromatografie-Säulen (wie Gel-Säulen) sind nicht erlaubt, Blasen einzutreten, sonst wird die Säulen Wirkung verringert und sogar kleine schwer zu vertreibende Gaskammern bilden. Um daher zu verhindern, dass Blasen in die Chromatografie-Säule gelangen, müssen Sie eine entgassete Flussphase verwenden und die Chromatografie-Säule streng installieren. a. Entfernen Sie die Dichtschraube am Eingang der unteren Chromatografie-Säule, um zu beobachten, ob ein Lösungsmittel durchläuft; b. Wenn ein Lösungsmittel läuft, kann die Chromatografie-Säule an die Rohrleitung angeschlossen werden, um das Eindringen von Blasen zu vermeiden; c. Wenn kein Lösungsmittel infiltriert, zeigt, dass dieses Ende der Chromatografie-Säule in die Luft gelangt ist, kann das Ausgangsende der Chromatografie-Säule an das Eingangsventil angeschlossen werden, um die Chromatografie-Säule in entgegengesetzter Richtung zu spülen, um die Luft in der Säule auszuschließen. Mit einem kleinen Durchfluss von 0,2 ml / min, um die Spektralsäule zu chromatisieren, wenn die Durchflussgeschwindigkeit des Lösungsmittels zu schnell ist oder ein plötzlicher Druckanstieg zu einer Verringerung der Säulenleistung führt; d. Wenn das ausgeflossene Lösungsmittel keine Blasen enthält, bedeutet das, dass das Gas in der Säule abgegeben wurde, und die Chromatografie-Säule in der richtigen Richtung verbunden wird, so dass die Blasen nicht in die Chromatografie-Säule gelangen können.

3. Reinigung der Chromatografie. Um zu verhindern, dass die Messstoffe und Verunreinigungen in der Chromatografie bleiben, sollte die Chromatografie nach jeder Probenanalyse rechtzeitig gereinigt werden. Zunächst mit einem starken Lösungsmittel für die Messprobe zu waschen, um die Chromatografie Säule zu waschen, um die häufig verwendete Gegenphase-Chromatografie in der Analysearbeit zum Beispiel, weil die erste Ausgang der Substanz ist polar große Substanz, zu diesem Zeitpunkt Anwendung von 100% Methanol oder die Verwendung von Isopropyl, Tetrahydrofuran und anderen polar schwachen Lösungsmittel wird adsorbiert in der Säule der polar kleinen Substanz abwaschen, die Menge der Abwaschung ist in der Regel 20-mal das Säulenvolumen. Wenn die Flussphase eine Pufferlösung ist, sollte die Chromatografie-Säule zuerst mit destilliertem Wasser gespült werden, um das Salz in der Säule abzuspülen, bevor sie mit einem geeigneten Lösungsmittel gespült wird.

Die Gelsäulen, die in der Gelfiltrationschromatographie verwendet werden, werden häufig mit einer Pufferlösung als Flussphase verwendet, die natürlich mit destilliertem Wasser gespült wird. Wenn es sich um kontinuierlichen Betrieb handelt, kann die Pufferlösung über Nacht in der Säule gelegt werden, aber eine geringe Durchflussgeschwindigkeit (< 0,5 ml / min) aufrechterhalten, um das Absetzen von Puffersalzen zu verhindern, wenn die Flussphase Halogenide enthält, auch über Nacht, muss die Chromatografie-Säule mit destilliertem Wasser gespült werden, um ihre Korrosion der Säule zu verhindern.

4. Lagerung der Chromatografie. Wenn die Chromatografie vorübergehend nicht verwendet wird, sollten Sie bei der Lagerung folgende Punkte beachten:

a. kurzfristige Platzierung innerhalb von ein paar Tagen, sollte zuerst mit einem Lösungsmittel spülen, um die Chromatografie Säulen (wie Gelsäulen mit destilliertem Wasser zu spülen), dann können die beiden Köpfe der Chromatografie Säulen mit einer Dichtschraube versiegelt werden.

b. Wenn die Chromatografie-Säule nicht lang verwendet wird, kann nur die oben genannte Methode nicht verwendet werden, dann sollte die Chromatografie-Säule mit dem in der Anleitung angegebenen Lösungsmittel verwendet werden, um die Chromatografie-Säule zu füllen, die Gegenphase-Säule verwendet in der Regel Methanol, die positive Phase-Säule kann mit Heptan oder Heptan verwendet werden, und die Gelsäule kann kein Wasser verwenden, da das Wachstum von Mikroben in der Säule die Säulenwirkung verringern wird, wenn 0,05% NaNs-Wasserlösung (Konservierungsmittel) angewendet wird, um die Chromatografie-Säule zu spülen und die Chromatografie-Säule zu dichten. Wenn die Chromatografie-Säule langfristig platziert wird, müssen beide Enden der Chromatografie-Säule versiegelt werden, um das Trocknungspänomen der Säulenfüllung aufgrund von Lösemittelflüchtigkeit zu verhindern, da dies zu einer erheblichen Verringerung der Säulenwirkung führen kann.

c. Die Chromatografie-Säule sollte bei Raumtemperatur gelagert werden, wenn sie in einer Umgebung unter 0 ° C platziert wird, wird die Säule gefriert, was auch zu einer Verringerung der Säulenwirkung führt.

5. Das Problem der Doppelspitzen der Chromatografie

Die Chromatografie-Säule nach der langen Verwendung, wenn es Verunreinigungen gibt, wird die Festphase am Eingang der Chromatografie-Säule "Plate Knoten" und unter der hohen Druckwirkung der Flussphase, den Kollaps des Kollaps bilden, wird der normale Chromatografie-Spitze der analysierten Probenkomponente in doppelte Spitze verwandelt, dann kann die Chromatografie-Säule nach der folgenden Methode repariert werden. Drehen Sie zuerst die Befestigungsmutter des Zylinderkopfes nach unten, dann wird festgestellt, dass die feste Phase im Zylinderkopf komprimiert ist, und wenn es schwer ist, kann sie über 10 mm zurückgezogen werden. In diesem Fall können wir mit der Nadelspitze den gelben Teil der fließenden Flächenplatte schneiden und diesen Zusammenbruchbereich mit der gleichen festen Phase ausfüllen, verdichten und dann die Befestigungsschraube der Chromatografie festlegen, um die Reparatur zu beenden. Wenn Sie die Probe mit einer reparierten Chromatografie-Säule machen, kehrt der Chromatografiespiegel zur Normalität zurück.

Die oben genannten Methoden beschreiben die richtige Verwendung und Fehlerbehebung von Chromatogrammen in mehreren Aspekten. Wenn man diese Angelegenheiten in der täglichen Arbeit ernst nimmt und das Problem rechtzeitig löst, verlängert man die normale Nutzungsdauer des Instruments erheblich und macht die Leistung des Instruments maximal möglich.