Fehler 1: Je mehr Instrumente, desto besser

Mit der reifen Anwendung der PCR-Technologie wird die Multiple-Amplifikation immer lebendiger und das fluoreszierende quantitative PCR-Gerät kann nicht überleben. Von Zui Anfang ABI Unternehmen eingeführt Single-Kanal-Fluoreszenz-Quantitative-PCR-Gerät Entwicklung, um heute alle Hersteller 4-Kanal, 5-Kanal und sogar 6-Kanal-Fluoreszenz-Quantitative-PCR-Gerät, schimmernde Wahl macht die Menschen ungeeignet, wenn jemand versehentlich in den "mehr Kanal, desto besser" Missverständnis.

Bei der Verwendung von 5-Kanal-Fluoreszenzquantiatoren einiger Hersteller muss ROX (ein Fluoreszenzfarbstoff) oder ein Referenzfarbstoff im Experiment verwendet werden, um die Genauigkeit und Genauigkeit der Ergebnisse zu gewährleisten. Seitdem gibt es nur vier effektive Kanäle, die tatsächlich mehrere PCR-Fluoreszenzsignale erkennen können, und die Verwendung von Korrekturfärbstoffen kann die Kosten für den späteren Gebrauch erhöhen. Einige fluoreszierende quantitative PCR-Test-Kanäle sind nur für fluoreszierende Farbstoffe oder Reagentien der eigenen Hersteller offen, und die effektiven Test-Kanäle sind nicht so viel wie in den Werbematerialen behauptet. Besonders wichtig ist es, vor dem Kauf einen effektiven Detektionskanal für fluoreszierende quantitative PCR-Instrumente zu bestätigen, und man kann nicht nur auf Werbung hören. Bei der Berücksichtigung der Anzahl der Kanäle der Multifluoreszenz-quantitativen PCR sollte auch von der tatsächlichen Lage im Labor ausgehen, Multiple-PCR ist nicht für alle geeignet und für alle verfügbar, da es das Experiment kompliziert.

Fehler 2: Echtzeit-PCR-Geräte benötigen keine Gradientenfunktion

Für die quantitative PCR-Reaktion mit Farbstoff-Methode, obwohl es eine Vielzahl von PCR-Prototer-Design-Software oder empirische Formeln zur Berechnung der Schmelztemperatur (Tm-Wert) gibt, sind die Formeln unterschiedlich, die Prototer-Sequenzen unterschiedlich und der Tm-Wert wird sehr unterschiedlich sein. Die Schmelztemperatur des Primators bestimmt die Ausbrenntemperatur. Und die Kombination der Basis in der Vorlage variiert, für spezielle Abschnitte können die Daten, die von der empirischen Formel erhalten werden, nicht unbedingt genaue Ergebnisse erzielen, die feinen Unterschiede in der Hitztemperatur können entscheidende Auswirkungen auf das Ergebnis haben, so dass die "Berührungsbedingungen" einmal ein sehr kopfschmerzliches Problem sind. Das Auftreten eines Gradienten-PCR-Teils löst einige Probleme - die Temperaturregelbedingungen für jedes Loch während der Reaktion können sich im Rahmen eines Gradientes ändern, und je nach dem Ergebnis können die Reaktionsbedingungen Schritt für Schritt ermittelt werden.

Nicht nur die Aushärtetemperatur, sondern auch die Variabilitätstemperatur und die Dehnungstemperatur können optimiert werden - dies ist für die meisten hochfidelitären Taq-Enzyme mit Polymerase-Hybridase-Amplifikationen wie Invitrogen, Clontech und Promega sehr wichtig, da die Reaktionstemperaturen zwischen Taq und Korrekturenzymen * erheblich unterschiedlich sein können, so dass die Dehnungstemperatur wichtig ist.

Die Verwendung von fluoreszierender quantitativer PCR mit Gradientenfunktion ermöglicht den Optimierungsprozess, den zuvor mehrere Experimente auf einmal durchführen konnten, was die mühsamen Experimente vereinfacht, die die PCR-Reaktionsbedingungen ausprobieren, was sowohl Zeit als auch Kosten spart.