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Exosomal-Forschung-Gehäuse? Simple Western verdoppelt die Effizienz
Datum:2025-10-21Lesen Sie:0
Exosomen (Exosomen)Es handelt sich um kleine Lipid-Nanopartikel mit einem Durchmesser von etwa 30 bis 200 Nanometern, die von den Endosomen abgeleitet werden, und die meisten lebenden Zellen sekretieren aktiv Exokrosomen durch die Wirkung der Zellströmung.[1]Egal ob in pathologischen oder physiologischen Zuständen kann die Freisetzung von Exosomen sowohl kontinuierlich als auch induziert sein und der Freisetzungsprozess ist dynamisch, kontrollierbar und funktionell relevant. Die molekulare Zusammensetzung und Freisetzung von Exosomen hängen vom Zustand ihrer Quellenzellen ab. Exokrosomen können aus einer Vielzahl von Zelllinien, primitiven Kulturen isoliert werden oder aus biologischen Flüssigkeiten wie Serum, Plasma und Speichel extrahiert werden. Angesichts der Vielfalt der Quellen haben Exokrosomen eine vielfältige physiologische Funktion und eine wachsende Anzahl von Studien zeigt, dass sie eine wichtige Rolle bei einer Vielzahl von pathologischen Zuständen wie Krebs, Infektionskrankheiten und neurodegenerativen Erkrankungen spielen. Somit werden die Ekrosomen zum Schlüsselobjekt der Flüssigkeitsbiopsie[2]Außerdem können die Exosomen auch durch Ingenieurwesen modifiziert werden, um mitPotenzielle Medikamententräger[3].
Aufgrund der geringen Größe der Exosomen ist die Trennung von Exosomen aus komplexen Biomassen eine Herausforderung und die Trennungsergebnisse sind in der Regel gering.Vor diesem Hintergrund, Simple Western ™ Die ideale Technik für die Untersuchung von Exosomen: Diese Methode benötigt nur 3 Mikroliter Proben und hat eine Pick-Sensitivität, die den Bedarf an den gewünschten Exosomen durch den herkömmlichen Western Blot erheblich reduziert.Anschließend können Antikörper mit spezifischen Tests auf Exokrosom-bezogene Antigene charakterisiert werden, die sowohl generische Marker für Exokrosome als auch Marker für ihre Ursprungszellen oder Körperflüssigkeiten sein können. In diesem Versuchsschema werden wir marktübliche Exosomal-Standards und Antikörper durch Simple Western nutzen. ™ Erkennung von allgemeinen Markern von Exosomen und Quellenspezifischen Markern.
Dieser Artikel beschreibt die Ergebnisse der Validierung der Wirksamkeit der Antikörper in der folgenden Tabelle mit den drei exosomischen Kriterien "menschliches Plasma, menschliches Serum und menschliche A549-Zellen (Lungenfollikuläre Epidermis-Krebszellen)":
01. Expression der allgemeinen exosomalen Marker
• Flotillin-1: Als klassischer allgemeiner Marker in allen drei Standardprodukten nachgewiesen (Abbildung 1A).
• Alix: In allen drei Standardprodukten ist die Expression vorhanden, aber in A549-Zellenquellen ist die Expression höher (Abbildung 1D).
02. Ausdruck von Quellenspezifischen Markern
Annexin V: als Apoptose-Marker und Antikoagulant, in A549-Zellen, Plasma-Herkunft-Ekrosomen, nicht in Serum-Herkunft-Ekrosomen nachgewiesen (Abbildung 1B).
• EGFR (HER1): nur in A549-Zellen nachgewiesen, keine Signale in Serum und Plasma (Abbildung 1C).
Abbildung 1 Verwendung von Simple Western ™ Messung des exosomalen Zielantigens. A：flotillin-1； B：Annexin V； C：EGFR； D：Alix。
03. Kennzeichen für besondere Behandlungsbedürfnisse
• CD63: Ein Signal, das auf die Auswirkungen der Glykoxylationsmodifikation auf den Nachweis dieses Markers hinweist, wurde nur nachgewiesen, wenn ein Exosomal-Standard mit PNGase F (Deglycylase) behandelt wurde (Abbildung 2).
04. Überprüfung anderer Marker
Die übrigen Antikörper in Tabelle 2 (z. B. Annexin A2, HSPA8/HSC70, TSG101 usw.) wurden durch Simple Western validiert und können das Ziel-Signal in den entsprechenden Ekrosomen-Standards nachweisen (Abbildung 2).
Abbildung 2. Schwimmweg-Ansicht der Detektion der einzelnen Zielantigene in exosomischen Standards aus Plasma und A549 Zellen.
—— Kernwerte der Simple Western Technologie —
1) Effizienz:Nur 3-5 μL Exosomenlösung (50 μL + für herkömmliche WB) sind erforderlich, um wertvolle Proben anzupassen; Die Kapillaren reduzieren den Probenverlust während des gesamten Prozesses und eignen sich für Membranproteine mit niedriger Fülle.
(2) hohe Empfindlichkeit: Pick-Niveau-Detektion untere Grenze, messbar CD63 / Alix und andere, durch PNGase F-Behandlung, um die Glykoxylierung zu brechen, um spezifische Detektionen wie EGFR zu erreichen.
(3) Anti-Matrix-Störung: 12-230kDa Kapillare Elektrophoresis Entmischung, kann nach der Ekrosome-Cracking direkt an Bord, ohne mühsame Reinigung.
(4) Mehrfach-Quantifizierung: Eine einzelne Probe synchronisiert acht Ziele, die MISEV-Standards entsprechen, und der Dynamikbereich deckt sechs Größengruppen ab.
(5) Automatisierungsprozess: 3 Stunden vollständige Automatisierung der Ergebnisse, um den Proteinbebau zu reduzieren; Jedes Loch ist unabhängig von der Qualitätskontrolle und erfüllt die Exokrosom-Vorbereitung QC.
(6) Präzise Quantifizierung: Unterstützung der absoluten / relativen Quantifizierung, geringe Probenvolumen + hohe Wiederholbarkeit, Anpassung an die Entwicklung von flüssigen Biopsymarkern und Beschleunigung der wissenschaftlichen Forschung zur klinischen Transformation.
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* Referenzen:
1. Exosomen, D M Pegtel und S J Gould, Jahresüberprüfung der Biochemie, 2019, 88:487–514.
2. Extrazelluläre Vesikeln – Biomarker und Effektoren des zellulären Interaktoms bei Krebs, J Rak, Frontiers in Pharmacology, 2013, 4:21.
3. Exosomen als rekonfigurierbare therapeutische Systeme, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari und I Mendes Pinto, Trends in der molekularen Medizin, 2017, 23(7):636–650.
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Shanghai Haoxing Science Equipment Co., Ltd. wurde 2019 gegründet und ist ein professioneller Anbieter von Laborausrüstung / Verbrauchsmaterialien und Analyseinrichtungen mit Sitz in Shanghai. Das Unternehmen widmet sich der Bereitstellung von in- und ausländischen Hightech-Spezialgeräten sowie technischen Beratungsdiensten für Kunden in den Bereichen Biologie, Medizin, Physikalienprüfung, chemische Analyse, Lebensmittel und industrielle Produktion.