In der Genexpression-Studie stellt microRNA (miRNA) wegen ihrer kurzkettigen Eigenschaften (etwa 22 nt lang) eine Herausforderung für die herkömmliche quantitative Detektion von Fluoreszenz dar. Wie genau diese kleinen Moleküle quantifiziert werden können, ist eine entscheidende Frage für Forscher. Derzeit ist der Hauptstrom-Technologieweg in die Stiel-Ring-Methode und die Addition-Methode unterteilt, beide Methoden haben jeweils Tausende Herbste, welcher Weg gewählt wird, hängt von den spezifischen Anforderungen des Experiments ab.

Beide sollen im technischen Prinzip die Herausforderungen im Design von miRNA-Retroskriptoren lösen.Stiel Ring MethodeDie Transkription erfolgt mit einem Prototyp mit einer speziellen Stahlring-Struktur, der sich an die 3'-End-Spezifizität von miRNA bindet und die Länge des Transkriptionsprodukts durch seine Stahlring-Struktur erhöht, was eine nachfolgende qPCR-Amplifikation erleichtert. Sein Hauptvorteil istHohe SpezifikationEs ist in der Lage, die Mitglieder der miRNA-Familie, die hochhomogen Sequenzen sind, effektiv zu unterscheiden und sogar Unterschiede zwischen einzelnen Basen zu erkennen, und wird daher als quantitativer "Goldstandard" angesehen.

undErgänzungsmethodeEine andere Strategie wird angewendet: Es wird zuerst durch PolyA-Polymerase mit einer Adeninschwanz (PolyA-Schwanz) am 3'-Ende des miRNA versehen und dann mit dem allgemeinen Oligo(dT)-Primer revers transkribiert. Das Merkmal dieser Methode istEinfache Bedienung und hoher DurchsatzMit nur einer Endreaktion können alle miRNAs revers transkribiert werden, was sich für Vorexperimente mit großem Screening oder Probenvolumen eignet.

In der praktischen Anwendung ist der Schlüssel zur Wahl das Gleichgewicht.Spezifikation und DurchflussWenn das Ziel der Studie die Validierung eines spezifischen, bekannten miRNA ist und es strenge Anforderungen an die Unterscheidung von Nuancen zwischen Familienmitgliedern gibt (z. B. Screening von Krankheitsmarkern), kann die StimmringmethodeGut.Die Besonderheit ist eine sicherere Wahl. Beispielsweise empfehlen Technologieanbieter bei den zugehörigen miRNA-Fluoreszenz-quantitativen Testdienstleistungen häufig die Stahlringmethode vorzugsweise, um die absolute Gengenauigkeit einzelner Genexpressionsdaten in klinischen Studien oder Grundlagenforschungen zu gewährleisten.

Im Gegensatz dazu, wenn sich die Forschung in der Phase der frühen Entdeckung befindet und das Expressionsspektrum von Hunderten von miRNAs in einer großen Anzahl von Proben gleichzeitig nachgewiesen werden muss oder die Gesamtmenge an RNA in der Probe extrem begrenzt ist, bietet die End-Addition-Methode mit den Vorteilen ihres kurzen Betriebsprozesses und der geringen erforderlichen RNA-Menge einen schnelleren Überblick über die gesamten Expressionsdaten.

Insgesamt handelt es sich um keine Alternative, sondern um ergänzende technische Mittel. Eine kluge Entscheidung beruht auf einem klaren Verständnis der Ziele des Experiments: ob man die Präzision einzelner Daten verfolgt oder das ganzheitliche Bild der Gruppen erkundet. Nur mit den spezifischen Anforderungen kann der richtige Weg zu zuverlässigen Ergebnissen gewählt werden.

miRNA Fluoreszenz Quantitative Testdienstleistungen

Produktvorstellung

Real Time PCR， Echtzeit-fluoreszierende quantitative PCR, auch als quantitative PCR oder qPCR bekannt,Es handelt sich um eine DNA-Verstärkungsreaktion, die jedes Mal mit fluoreszierenden Chemikalien gemessen wird.Polymeraskettenreaktion(PCR) Methode der Gesamtmenge des Produkts nach dem Zyklus. Methode zur quantitativen Analyse einer bestimmten DNA-Sequenz in einer Probe mittels innerer oder externer Parametrie

Aufgrund der Vorteile der quantitativen PCR mit einfacher Bedienung, schneller und einfacher Bedienung, hoher Empfindlichkeit, guter Wiederholbarkeit und niedriger Verunreinigungsrate wird sie weit verbreitet in medizinischen Tests, Wirksamkeitsbewertungen von Arzneimitteln, Genausdrucksforschungen, Genmodifizierungsforschungen, Gentests, Pathogenenprüfungen, Tier- und Pflanzentests, Lebensmittelprüfungen und anderen Bereichen verwendet.

Experimentelle Prinzipien

Die sogenannte Echtzeit-Fluoreszenz-quantitative PCR-Technologie bezieht sich auf das Hinzufügen von Fluoreszenzgruppen in das PCR-Reaktionssystem, die Akkumulation von Fluoreszenzsignalen in Echtzeit zur Überwachung des gesamten PCR-Prozesses und schließlich die Methode der quantitativen Analyse unbekannter Vorlagen durch Standardkurven.

Echtzeit-Fluoreszenz-Quantitative-PCR-Technik-Typ-Übersicht: DNA-Bindungsfarbstoff-Methode, Sondenbasierte Chemie, Plötzliche Färbstoff-Primiermethode

Experimentelle Anwendungen

DNA- und RNA-Quantifizierung; Genexpression-Verifizierung; Genetische Identifizierung; SNP-Klassifizierung; Erkennung von Krankheitserregern und Viren; Mehrfache PCR

Experimentergebnisse