Als entscheidendes automatisiertes Gerät für Immunoprüfungen wie ELISAs beeinflusst die Genauigkeit ihrer Betriebsergebnisse direkt die Zuverlässigkeit der Versuchsdaten. Während der praktischen Verwendung können jedoch mehrere Faktoren den Plattenwascheffekt beeinträchtigen und zu Problemen wie erhöhtem Hintergrundgeräusch, schwächerem Signal oder falsch positivem / falsch negativem führen. Folgende vier Dimensionen der Analyse der wichtigsten Einflussfaktoren aus Geräteleistung, Betriebsvorschriften, Reagenzien und Verbrauchsmaterialien und Umweltbedingungen:
Einstellung der eigenen Parameter des Geräts
1. Reinigungsmodus und Programmeinstellungen
- Restflüssigkeitskontrolle: Die Tiefe des Waschkopfes muss genau mit der Reaktionsbottonderlage übereinstimmen. Wenn die Sonde die Flüssigkeitsoberfläche nicht ausreichend berührt, kann es zu Abfallflüssigkeitsresten führen; Übermäßiger Unterdruck kann die Antikörperschicht kratzen und körperliche Schäden verursachen.
- Anzahl der Spülungen und Aufenthaltsdauer: Eine kurze Spülung macht es schwierig, die nicht gebundenen Bestandteile zu entfernen, während zu viele Male den gebildeten Antigen-Antikörper-Komplex zerstören können. Einige Geräte unterstützen ein gradientes Druckspülen, um die Reinigungseffizienz und die Probenstabilität auszugleichen.
- Schockfestigkeit: Bei hochhaftigen Substanzen (z. B. Zellklysaten) muss die Entbindung durch hochfrequente Vibrationen unterstützt werden, aber starke Schockungen können eine Kreuzverschmutzung auslösen.
Mechanische Präzision und Wartungszustand
- Langfristig verwendete Plattenwaschmaschinen sind anfällig für Spurverschiebungen, Luftdruckinstabilität und andere Probleme, die zu einer Abnahme der Gleichmäßigkeit der Reinigung aller Löcher führen. Die regelmäßige Kalibrierung der Vertikalität des Wäschekopfes und die Überprüfung der Rohrdichtung sind von entscheidender Bedeutung.
- Ein Überfluss oder eine schlechte Abflüssigkeit im Abfalltank verursachen eine umgekehrte Absaugung, so dass die Reinigungsflüssigkeit in das Reaktionssystem zurückfließt.
2. Maß an Betriebsnormalisierung
1. Konsistenz der Platte
- Die Neigung der Mikroporenplatte führt zu einer ungleichmäßigen Kraft in der diagonalen Richtung des Plattenkopfes, und die Randlöcher sind leicht zu reinigen. Es wird empfohlen, eine spezielle Plattenfestigung zu verwenden und sicherzustellen, dass jede Ladeposition gleichmäßig ist.
- Die Wahl und die Anpassung der Dichtmembran beeinflussen direkt den Flüssigkeitseindringungsweg. Schlechte Membranmateriale können unter hohem Druckspülen zerbrechen und Schadstoffe freisetzen.
2. Risiko menschlicher Fehlbehandlung
- Vergessen Sie, die Pufferflasche zu ersetzen oder die Säure-Alkali-Lösung zu verwechseln, verändert die pH-Umgebung direkt und beeinflusst die Antigen- / Antikörper-Aktivität.
- Überlastungsbetrieb (z. B. Überlagerung mehrschichtiger Platten) außerhalb des Geräteträgebereichs, was zu einer anormalen Druckverteilung des Waschkopfes führt.
III. Reagenzien und Verbrauchsmaterialien
1. Eigenschaften des Waschpuffers
- Die Konzentration des Oberflächenaktivs, der Tween-20 enthält, muss streng unter der kritischen Kapselkonzentration kontrolliert werden, zu hoch wird das Protein aufgelöst, zu niedrig kann die nicht spezifische Adsorption nicht effektiv blockieren.
- Ungerechte Intensität von Salz-Ionen kann dazu führen, dass die Protein-Fällung oder der Ladungsschirmeffekt ausfällt.
2. Kompatibilität des Plattenmaterials
- Polystyrenplatte ist besser hydrophob als Polypropylenplatte, besser geeignet für feste Träger; Einige modifizierte Kunststoffe können jedoch in Anwesenheit von organischen Lösungsmitteln aufblasende Verformungen auftreten und die Öffnungsgröße ändern.
- Niedrige Adsorptionsplatten, wenn sie nicht geschlossen behandelt werden, können nicht spezifische Verbindungen auftreten und den Hintergrundwert erhöhen.
4. Störungen der Umweltbedingungen
1. Temperatur- und Feuchtigkeitsschwankungen
- Hochtemperaturbeschleunigte Enzyme fördern die Farbreaktion und verkürzen die Dauer des effektiven Lesefensters; Eine hohe Luftfeuchtigkeit fördert die Kondensation von Wasser auf der Innenseite des Deckels und verdünnt das Reaktionssystem.
- Lokale Temperaturunterschiede durch direktes Blasen der Klimaanlage können Kondensatwasser tropfen und lokal hohe Konzentrationsbereiche bilden.
2. Partikelverschmutzung
- Staubpartikel in der Luft können exogene Proteine tragen, die sich in ungeschlossenen Reaktionslöchern absetzen und ein positives Signal simulieren. Der Einsatz eines sauberen Arbeitstisches reduziert diese Störungen erheblich.
5. Biologische Variationsfaktoren
Komplexität der Probenmatrix: Komplexe Proben wie Serum, Cerebral-Spinal-Flüssigkeit enthalten hohe Konzentrationen von Heteroproteinen, die möglicherweise nicht vollständig entfernt werden können. Zu diesem Zeitpunkt müssen zusätzliche Blockierungsschritte eingeführt oder die Waschzeit verlängert werden.
Unterschied in der Antigen/Antikörper-Affinität: Fängende Moleküle mit schwacher Bindungskraft sind leichter zu waschen und zeigen sich als ungewöhnlich niedrige OD-Werte.