Internavelstammzellen(hUC-MSCs) sind eine Stammzelle mit einer multipotentialen Differenzierungsfähigkeit, die aus der Nabelschnur eines Neugeborenen extrahiert wurde. Mesoclimale Stammzellen aus Nabelschnur erhalten nicht nur die biologischen Eigenschaften der Mesoclimale Stammzellen (Oberflächenantigen-Marker, die sich in Knotenzellen, Knorpelzellen und Fettzellen differenzieren können), sondern sind auch sicherer und primitiver als Mesoclimale Stammzellen aus anderen Quellen und haben eine stärkere Vermehrung, Differenzierung und Immunregulation.
Darüber hinaus haben die Qualitätsstammzellen zwischen Nabelschnur auch die Merkmale der einfachen Trennung, niedriger Immunogenität, keine ethischen Einschränkungen, einer großen Anzahl an verfügbaren Zellen und einer standardisierten Produktion in großem Maßstab, die breite Perspektiven für klinische Anwendungen haben. Dieses Produkt unterliegt strengen Qualitätskontrollen und Prüfungen, um seine Sicherheit und Wirksamkeit zu gewährleisten.
(1) Wenn die Zelldichte 80% -90% erreicht, kann die Übertragung durchgeführt werden (beachten Sie, dass die Zellen nicht zu dicht sind, sonst leicht zu differenzieren), entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 Mal mit DPBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen;
(2) Fügen Sie 1 mL rekombiniertes Pansenzym in eine Kulturflasche hinzu, damit die Verdauungsflüssigkeit alle Zellen durchdringt, 1-3 min in einer 37 ° C-Kultivkammer verdauen und unter dem Mikroskop beobachten, bis der größte Teil der Zellen sich rundet und abfällt (je nach Zellzustand).
(3) Fügen Sie in sterile Zentrifugerrohre, 1.000 Umdrehungen pro Minute Zentrifuge für 5 Minuten und werfen Sie 3 ml MSC-Medium, um die Verdauung zu beenden. Vorsichtig schlagen und nach 1-2 ml MSC-Medium blasen.
(4) in einem Verhältnis von 1: 3 oder 1: 4 zu übertragen, oder nach der Zellzählung in einer Konzentration von 5-8 x 103 Zellen / cm2 in eine neue Kulturflasche, nachdem das entsprechende Volumen des MSC-Mediums ergänzt wurde, in 37 ° C, 5% CO2-Kultivraum kultiviert.
(5) Wechseln Sie die Flüssigkeit alle 2-3 Tage, kultivieren Sie sie bis zu 2-4 Tagen, bis die Zellwachstumsdichte etwa 80% erreicht hat, und führen Sie die anschließende Übertragung oder das Gefrieren durch.
Verdauungszeit: Die Verdauung der Pansenze muss in etwa einer Minute kontrolliert werden, um zu vermeiden, dass übermäßige Verdauung zu Zellschäden führt.
Impfdichte: Übertragung im Verhältnis von 1: 3 bis 1: 4 unter der Grundfläche, um zu dicht oder zu dünn zu vermeiden.
Generationsselektion: Es wird empfohlen, Subzellen der niedrigeren Generation wie die P2-Generation zu verwenden, um die experimentellen Ergebnisse zu gewährleisten.
Spezielle Medien: Verwendung spezieller Medien, die Wachstumsfaktoren enthalten, um die Zellverpflanzung und Differenzierung zu fördern.