Organoide Modelle werden immer beliebter in der biologischen Forschung und Screening aufgrund ihrer Fähigkeit, die Komplexität realer Gewebe zu reproduzieren. Um menschliche Lungenorgane im Körper zu simulieren, kultivierten wir primitive menschliche Lungenepithelzellen unter Bedingungen, die zur Bildung von 3D-Strukturen beitragen, um die morphologischen und funktionellen Merkmale der Lungenluftwege zu reproduzieren. In der Lungenorgankultur werden epiteliale Stammzellen und Vorläuferzellen in ECM kultiviert, die eine Reihe von Wachstumsfaktoren hinzugefügt haben. Die Organoide wachsen anschließend zu komplexen Strukturen und behielten mehrere Epithelzellcluster. Diese Eigenschaften machen die Organoidenkultur zu einem vielversprechenden Mittel, das weit verbreitet in grundlegenden und transformativen Methoden wie Medikamentescreening und Krankheitsmodellierung eingesetzt werden kann.
Hier erläutern wir eine hochkonzentrierte Bildgebungsmethode, die das Wachstum und die Differenzierung von Lungenorganen überwachen und visualisieren kann, die Rekonstruktion von 3D-Strukturen, die komplexe Analyse von organoiden Strukturen, die Zellmormologie und Vitalität sowie den Ausdruck verschiedener Zellmarker. 3D Lungenorgane werden in Matrigel Domes implantiert. Die sich entwickelnden Organoiden umfassen kugelförmige Objekte mit komplexen Formen, einschließlich Hohlräume und Blasenstrukturen. Während des achtwöchigen Wachstumsprozesses beobachteten wir eine Zunahme der Größe und Komplexität. Überwachen Sie die Organoide mit transmittiertem Licht und scannen Sie anschließend die gefärbten Organoide mit 20-30 Schichten auf der Z-Achse mit einem Objektivmehrfach von 10 bis 40x durch ein Matrixgel. Verwenden Sie ImageXpress ® Confocal HT.ai Intelligente Kofokussierung
Die neu konfigurierte Laserlichtquelle des Bildanalysesystems erhöht die Beleuchtungsintensität deutlich, was die Helligkeit, die Erkennungsempfindlichkeit und die Bildgeschwindigkeit erheblich erhöht.