Die richtige Verwendung von Ultrafiltrationszentrifugen ist der Schlüssel zum Erfolg des Experiments

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Datum:2025-12-01Lesen Sie:1

Ultrafiltrierte Zentrifugen sind ein Labor-Verbrauchsmaterial für die Zentrifizierung und Membran-Trennung, die weit verbreitet wird, um Proteinkonzentration, Entsalzung, Pufferaustausch, Nukleinsäurereinigung und Entfernung kleiner Moleküle und andere biochemische Operationen. Sein Kern ist eine eingebaute Ultrafilter-Membran mit spezifischem Abschlagmolekulargewicht, die die Probe durch die Membranlöcher durch Zentrifugenkraft antreibt, um eine effiziente Trennung der Zielmoleküle zu erreichen. Der falsche Betrieb kann jedoch zu Membranstopfungen, Probenverlusten, niedriger Recyclingrate und sogar zu einem Bruch des Rohres führen. Die richtige Verwendung ist der Schlüssel zum Erfolg des Experiments.

1. Vorbereitung vor der Verwendung

Präzise Auswahl der Membrane nach dem Molekulargewicht: das Zielmolekül sollte 2-3 Mal größer als MWCO sein und die kleinen molekularen Verunreinigungen kleiner als 1/2 MWCO, um eine effektive Absperrung und Durchdringung sicherzustellen;

Befeuchtungsmembran (falls erforderlich): auf die hydrophobe Membran (wie PVDF), fügen Sie zunächst eine kleine Menge Puffer oder Ethanol befeuchten für 5 Minuten, dann entfernen Sie es zentrifugierend, um zu vermeiden, dass der Luftwiderstand die Durchflussgeschwindigkeit beeinflusst;

Überprüfen Sie die Integrität des Rohres: Stellen Sie sicher, dass der Filterfilm nicht gebrochen ist und dass der Abdeckungsring intakt ist, um Zentrifugalleckagen zu vermeiden.

2. Spezifikationen zur Probenladung

Kontrolle des Probenvolumens: in der Regel nicht mehr als 75% der maximalen Kapazität des Zentrifugerrohrs (z. B. 15 ml Rohr Probenaufnahme ≤ 11 ml), Konzentrationsraum reserviert;

Vorklärung: Proben, die Partikel oder Zellbrücke enthalten, müssen zuerst mit niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert werden (z. B. 3.000 x g, 5 min) oder filtriert werden, um eine Verstopfung der Membranlage zu verhindern;

Vermeiden Sie eine hohe Viskosität oder eine hohe Konzentration: Sie können den Anfangsfluss entsprechend verdünnen.

3. Zentrifugalparametereinstellung

Bezug auf die vom Hersteller empfohlene Drehzahl: in der Regel 3.000-5.000 x g, streng verboten Geschwindigkeitsüberschreitung (siehe den maximalen RCF-Wert der Rohrwandmarkierung);

Stellen Sie die richtige Zeit fest: Stufenweise Zentrifugieren (z. B. 10-15 Minuten je), beobachten Sie das Volumen der Konzentration und vermeiden Sie Trockenfilme;

Kryotemperaturbetrieb: Verwenden Sie eine 4 ° C-Gefrierzentrifuge für thermisch empfindliche Proteine, um Degeneration zu verhindern.

4. Konzentration und Waschmöglichkeiten

Pufferaustausch: Wenn Sie auf etwa 100-200 μL konzentrieren, fügen Sie einen neuen Puffer mit einem anderen Volumen hinzu, mischen Sie ihn und zentrifizieren Sie ihn nach 2-3 Wiederholungen, um > 95% kleiner molekularer Verunreinigungen zu entfernen;

Vermeiden Sie das Trocknen der Membran: Die Konzentration hält am Endpunkt mindestens 50 μL Flüssigkeit, die trockene Membran verringert die Recyclingrate unwiderruflich;

Sanft mischen: mit Pipetten langsam schlagen, nicht starke Schütterungen beschädigen die Moleküle.

Recycling und Reinigung (wenn wiederverwendbar)

Die meisten Ultrafilter-Zentrifugerrohre sind einmalig konzipiert, aber einige Modelle können wiederverwendet werden;

Spülen Sie sofort nach der Verwendung mit deionisiertem Wasser und einweichen Sie mit 0,1 MNaOH oder spezieller Reinigungsflüssigkeit, um die Rückstände zu entfernen;

Sterilisierung oder Trocknung mit hohem Druck ist streng verboten, um keine Verformung der Membranstruktur zu gewährleisten.

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