Die gemischte Ionenaustauschsäule kombiniert den doppelten Retentionsmodus des Ionenaustauschs und der Gegenphase-Chromatografie, deren Betriebsmethode die Eigenschaften beider Mechanismen berücksichtigt, die spezifischen Schritte und die Schlüsselpunkte sind wie folgt:
1. Vorbereitung vor der Operation
Säulenauswahl
Wählen Sie eine geeignete Mischsäule basierend auf den Eigenschaften der Zielverbindung (z. B. pKa-Werte, Polarität). Zum Beispiel eignet sich die Säuresulfonsäure-Säule für alkalische Verbindungen von pKa2-10 (z. B. Amine, Sulfonamide).
Bestätigen Sie die Stabilität der Säulenmatriz (z. B. Styrol-Divinylbenzen-Copolymere) und der funktionellen Gruppen (z. B. Sulfonsäuregruppen), um sicherzustellen, dass sie nicht im pH-Bereich 0-14 und in organischen Lösungsmitteln zerfallen.
Ausrüstungsprüfung
Überprüfen Sie, ob die Durchflussgeschwindigkeit und der Druckbereich des Chromatogrammsystems (z. B. HPLC) den Säulenanforderungen entsprechen (z. B. Edelstahlsäulen mit einem maximalen Druck von 4500 psi und Glassäulen mit 3000 psi).
Installieren Sie eine Schutzsäule, um eine Verschmutzung oder Verstopfung der Analysezüste zu verhindern.
Reagenzbereitung
Entflüssigung (z. B. saure Methanollösung, Zitronensäurepuffer) und Entgasung, Filterung (0,2-0,5 μm Filterfilm), um Blasen und Partikelstörungen zu vermeiden.
Bereiten Sie aktivierte Lösungsmittel (z. B. Methanol, Wasser) und eine Laundry (z. B. eine Mischung aus organischen Lösungsmitteln und Puffersalzen) vor.
II. Betriebsschritte
Aktivierung der Säulen
Ziel: Entfernen von Verunreinigungen, um die Fixierphase vollständig aufblasen zu lassen, um die Säulenwirkung zu gewährleisten.
Methode:
Die Säulen werden nachfolgend mit Methanol (3-5-faches Säulenbettvolumen, Durchflussgeschwindigkeit 1-5 ml / min) und Wasser (gleiches Volumen und gleiche Durchflussgeschwindigkeit) aktiviert.
Wenn die Säule lange nicht verwendet wird, muss sie zuerst mit einer großen Menge Wasser gespült werden, dann mit Methanol und schließlich in einer 50%igen Wasserlösung aufbewahrt werden.
Auf der Probe
Zweck: Ziel mit der Festlegung zu verbinden, und Verunreinigungen fließen mit dem Fluss aus.
Methode:
Die Probenlösung wird langsam durch die Säule mit einer Durchflussgeschwindigkeit von 0,5-2 mL / min durchgeführt, um einen gleichmäßigen Kontakt mit der Festphase zu gewährleisten.
Wenn die Probenkonzentration zu hoch ist, muss sie verdünnt werden, um zu vermeiden, dass die Tragfähigkeit der Säulen überschritten wird.
Waschen Entmischen
Zweck: Entfernen von Verunreinigungen, die sich von den Eigenschaften des Zielstoffs unterscheiden, aber an der Säule adsorbieren.
Methode:
Wählen Sie eine Lauge, die organische Lösungsmittel und Puffersalze enthält (z. B. 5% Methanol-Wasserlösung), mit einer Dosierung von 3-5 Mal das Säulenbettvolumen und einer Durchflussgeschwindigkeit von 1-3 ml / min.
Um das Entwaschen des Ziels zu vermeiden, müssen die Arten und Verhältnisse der Gonorrhea optimiert werden.
Ziel entfernen
Ziel: Zerstörung der Wechselwirkung zwischen dem Zielobjekt und der Festphase, Sammlung von Waschflüssigkeit.
Methode:
Wählen Sie eine Mischung aus hohen Konzentrationen von Säure / Alkali und organischen Lösungsmitteln (wie eine saure Methanol-Lösung) als Waschmittel, mit einer Dosis von 2-4 Mal das Säulenbettvolumen und einer Durchflussgeschwindigkeit von 1-3 ml / min.
Sammeln Sie die Waschflüssigkeit, um zu vermeiden, dass übermäßiges Waschen zum Verlust von Zielobjekten führt.
Säulenregeneration und Erhaltung
Ziel: Wiederherstellung des ursprünglichen Zustands der Säulen und Verlängerung der Lebensdauer.
Methode:
Spülen Sie die Säulen zuerst mit einer großen Menge Wasser, dann mit Methanol und speichern Sie sie schließlich in einer 50%igen Wasserlösung mit Methanol und verschließen Sie sie bei der richtigen Temperatur.
Wenn die Säule kontaminiert ist, kann mit einer speziellen Lösung wie 1MNH4 NO3 oder Isopropanol gereinigt werden.
III. Wichtige Hinweise
Durchflussgeschwindigkeitssteuerung
Vermeiden Sie, dass zu hohe Durchflussgeschwindigkeiten zu einer Abnahme der Zylinderwirkung oder zu einem Festphasenverlust führen, während zu langsame Durchflussgeschwindigkeiten die Analysezeit verlängern.
Die Durchflussgeschwindigkeit muss schrittweise geändert werden, um Störungen des Füllbettes zu verhindern.
pH- und Temperaturgrenzen
Vermeiden Sie die Beschädigung der Silikonmatrikssäulen mit extremen pH-Werten wie alkalischen Lösungsmitteln mit pH > 6,5 oder sauren Lösungsmitteln mit pH < 2,5.
Es wird empfohlen, die Säulen bei Raumtemperatur unter 40 ° C zu verwenden, da hohe Temperaturen die Stabilität beeinträchtigen können.
Auswahl der Waschflüssigkeit
Vermeiden Sie die Verwendung von Puffern, die Zersetzungsprodukte wie Salicylsäure enthalten, um die Eigenschaften der Festphase zu vermeiden.
Die Waschflüssigkeit muss frisch hergestellt werden, um mikrobielle Verunreinigungen oder Änderungen der Ionenstärke zu vermeiden, die den Trennungseffekt beeinflussen.
Probenvorbehandlung
Filtern Sie die Probe, um Partikelverunreinigungen zu entfernen und eine Verstopfung der Säulen zu verhindern.
Wenn die Probe stark von der Flussphase abweicht, ist eine Derivation oder Verdünnung erforderlich.
Beispiele für Anwendungsszenarien
Lebensmittelsicherheitsprüfung: Bei der Erkennung von Melamin (alkalischer Verbindungen) in der Milch wird eine gemischte schwache Cationienaustausch-Gegenphase-Säule verwendet, um eine effiziente Trennung durch den Cationienaustausch und die Gegenphase-Retention-Doppelmodus zu erreichen.
Drogenanalyse: Bei der Analyse alkalischer Drogen und ihrer Metaboliten im Blut wird der doppelte Retentionsmechanismus des gemischten starken cation-Ionen-Austausch-Gegenphase-Säulen verwendet, um die Trenneffizienz und Empfindlichkeit zu verbessern.
Umweltüberwachung: Bei der Detektion alkalischer Schadstoffe (z. B. Aminverbindungen) im Wasser wird eine schnelle Abwaschung und quantitative Analyse des Zielobjekts durch optimierte Abwaschbedingungen erreicht.