Erster Schritt:PolypeptidsynthesizerVorbereitung vor dem Betrieb – die Grundlage für Erfolg legen
Umwelt- und Ausrüstungsprüfung
Wählen Sie einen trockenen, sauberen und temperaturstabilen Ort (20 °C ± 5 °C), um Feuchtigkeit, hohe Temperaturen oder Staubstörungen zu vermeiden.
Stellen Sie sicher, dass das Gerät reibungslos installiert ist und dass die Stromspannung, die Frequenz und die Geräteanforderungen entsprechen (z. B. 60-100 psi für das Druckluftdruckmesser „AIR“ und 5-10 psi für das Druckluftdruckmesser „N₂“).
Überprüfen Sie, ob die Lösungsmittelspeicherflasche und die Gasleitungsverbindung eng sind, um Leckagen zu verhindern.
Vorbereitung von Materialien und Reagenzien
Bereiten Sie hochreine Aminosäuren, Aktivierungsmittel wie HBTU, Lösungsmittel (DMF, DCM) und Harze vor, um sicherzustellen, dass es keine Verunreinigungen gibt.
Das Reagenz wird nach dem Syntheseschema gewogen und streng proportional vermischt (z. B. 3-fach überschüssige Aminosäuren für die gekoppelte Reaktion).
Das Harz wird dem Reaktor hinzugefügt, mit DCM aufgeblasen und getrocknet und mit DMF gewaschen, um Verunreinigungen zu entfernen.
Parametereinstellung und Kalibrierung
Geben Sie die Polypeptide-Sequenz ein und stellen Sie die Reaktionsbedingungen fest (Temperatur, Zeit, Lösungsmittelanteil).
Beispiel: Fmoc Entschützung (20% Pipidin / DMF, 5 min x 2 mal); Die gekoppelte Reaktion (3-fache Überdosis von Aminosäuren, 1 Stunde).
Führen Sie ein Geräte-Selbstprüfverfahren durch, kalibrieren Sie Temperatur, Druck, Flüssigkeitsnadeln und andere Parameter, um die Genauigkeit des Sensors zu gewährleisten.
Schritt 2: Syntheseprozessoperationen – Analyse der Kernstufen
Syntheseprogramm starten
Schalten Sie die Stromversorgung des Synthesizers und den Druckluftschalter ein und starten Sie das Standardprogramm.
Das Instrument führt den Entschutz (z. B. Entfernung von Fmoc-Gruppen), die Kopplung (Aminosäurenkreuzung) und den Waschzyklus automatisch durch und überwacht die gesamte Reaktionstemperatur, Druck und pH-Werte.
Wichtige Betriebspunkte
Entschützung: Die Entfernung der Amino-Schutzgruppen mit einem alkalischen Lösungsmittel (z. B. 20% Pipidin / DMF) muss zweimal wiederholt werden, um gründlich zu gewährleisten.
Koppelreaktion: Die aktivierte Aminosäureleisung wird in die Reaktionskammer injiziert, DMF auf die richtige Konzentration ergänzt und 1 Stunde zur Bildung einer Peptidbindung gerührt.
Waschen: Nach jedem Schritt der Reaktion mit DMF reinigen, um unreaktierte Substanzen und Nebenprodukte zu beseitigen und die Anhäufung von Verunreinigungen zu reduzieren.
Echtzeit-Überwachung und Anpassung
Überwachen Sie den Reaktionsprozess durch UV-Absorption oder Massenspektrometrie, um sicherzustellen, dass jeder Schritt wie erwartet abläuft.
Wenn eine ungleichmäßige Reaktionsflüssigkeit festgestellt wird, ändern Sie die Drehzahl des Rührers; Wenn die Temperatur abweicht, überprüfen Sie die Position der Heizscheibe.
Schritt 3: Nachsynthese und Wartung – Langfristige Stabilität
Produktsammlung und Reinigung
Mit dem Klät (z. B. TFA/Wasser/Triisopropylsilan = 95:2,5:2,5) werden 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, um das Polypeptid vom Harz abzulösen.
Filtern, um das Harz zu entfernen, nach der Konzentration des Lysats das grobe Peptid mit Ether abzusetzen und das feste Produkt durch Zentrifugieren und Waschen zu erhalten.
Die Reinigung mit einer hocheffizienten Flüssigchromatografie (HPLC) entfernt Verunreinigungen und erhält Polypeptide mit hoher Reinheit (> 95%).
PolypeptidsynthesizerReinigung und Wartung
Sofortige Reinigung: Reinigen Sie Reaktionsbehälter, Nadeln, Pumpenkopfe und Rohrleitungen sofort nach der Synthese mit Ethanol oder deionisiertem Wasser, um Resistenzkorosionsgeräte zu vermeiden.
Regelmäßige Wartung: Monatlicher Austausch von Verschleißteilen (z. B. Dichtungsringe, Nadeln), Kalibrierung der Sensorgenauigkeit; Maschinenteile vierteljährlich schmieren, um den reibungslosen Betrieb zu erhalten.
Langzeitaufbewahrung: Wenn das Gerät inaktiv ist, wird es nach der Reinigung und Entfernung an einem trockenen, belüfteten Ort gelagert, um Rost oder Feuchtigkeit zu verhindern.
Fehlerbehebung und Aufzeichnung
Häufig gestellte Fragen: Pumpenkopfleckage (Austausch des Dichtungsringes), zu hohe Temperatur des Reaktionsbehälters (Einstellung der Position der Heizplatte), Nichteinschaltung der Anlage (Überprüfung der Stromversorgung und der Steuerplatte).
Aufzeichnung und Berichterstattung: Detaillierte Aufzeichnung der Betriebsparameter jedes Schrittes (Reagenzverbrauch, Reaktionszeit, Temperatur) und der Produktreinheit, Erstellung von Experimentsberichten, die die Grundlage für eine weitere Optimierung bilden.