DNA/RNA-SynthesizerDie Anwendungsmethoden (z. B. DNA) umfassen die Bereitstellung von Reagenzien, Sequenzeingang, Parametereinstellung, Synthesekolonenprüfung, Rohrleitungsreinigung, Syntheseprozessüberwachung und Produktbehandlung. Im Folgenden werden detailliert erläutert:
Reagenzbereitung:
Überprüfen Sie sorgfältig die Dosen in allen Reagenzflaschen auf dem Synthesizer und tauschen Sie die Reagenzflaschen, wenn nötig, mit besonderer Aufmerksamkeit auf größere Mengen an Lösungsmitteln wie Acenitril.
Stellen Sie sicher, dass die Reagenzflaschengruppe und die Basisflaschengruppe gut versiegelt sind und einen gewissen Druck aufrechterhalten, um den Eintritt von Außenluft zu verhindern, die die Synthese beeinflusst.
Sequenzeingang:
Die Eingabe der zu synthetisierenden DNA-Sequenz in den Synthesizer kann über eine computergestützte Entwurfssoftware erfolgen, die Faktoren wie die Kryptonpräferenz, die Sekundärstruktur und die Einschränkung der Enzymstellen berücksichtigt.
Überprüfen Sie, ob der gewählte Syntheseschritt korrekt ist, um sicherzustellen, dass der Syntheseprozess gemäß dem vorgegebenen Prozess abläuft.
Parametereinstellungen:
Bei der Auswahl der Endmethode wird der ursprüngliche Zustand des Instruments in der Regel TritylOffAuto, wenn die Absicht ist, das gereinigte Oligonukleotid mit einer 5'-DMT-Gruppe zu verbinden, in den TritylOnAuto-Endzustand umgewandelt.
Geben Sie den gewünschten Speichernamen unter dem Benutzernamen jedes Säulenmonitors ein, um die Verwaltung und Verfolgung zu erleichtern.
Markieren Sie jede Sammelflasche durch einen Code anstelle der entsprechenden DNA-Sequenz, um die Identifizierung und Klassifizierung zu erleichtern.
Synthese Säulenprüfung:
Führen Sie den Schritt StartColumn aus, um die Position der einzelnen Säulen zu überprüfen, um sicherzustellen, dass die Säulen auf dem Synthesizer an der richtigen Position sind, um einen Synthesefall aufgrund von Positionsabweichungen zu vermeiden.
Überprüfen Sie, ob die auf dem Synthesizer angeschlossenen Lösungsmittelrückstände (Abflüssigkeitsflaschen) gefüllt sind, um zu verhindern, dass die Abflüssigkeitsflaschen durch Überfüllung zu Flüssigkeitsüberschlüssen führen und die Syntheseumgebung beeinflussen.
Reinigung von Rohren:
Wenn der Partitionskollektor verwendet wird, um die Abflüssigkeiten jedes DMT-Entschutzschritts zu sammeln, stellen Sie sicher, dass die Prüfröhre vollständig sauber ist und öffnen Sie den Partitionskollektor, um sicherzustellen, dass die DMT-Abfallleitung zum Partitionskollektor führt.
Starten Sie den Zyklus und laufen Sie das Startprogramm zur Reinigung der Reagenzreaktionen, um das ursprüngliche Reagenz zu entfernen und zu verhindern, dass das alte Reagenz eine Störung der neuen Synthese verursacht.
Syntheseprozessüberwachung:
Während der Synthese kann die Gesamtleitfähigkeit der DMT-Ionen, die in jedem DNA-Synthesezyklus freigesetzt werden, über einen elektrisch leitenden Flusspool bestimmt und der Verlauf der Synthesereaktion überwacht werden.
Überprüfen Sie regelmäßig den Betriebszustand des Synthesizers, um sicherzustellen, dass die Parameter wie Temperatur, Druck, Zeit usw. im normalen Bereich liegen.
DNA/RNA-SynthesizerFertigstellung und Produktbearbeitung:
Nachdem die Synthese abgeschlossen ist, wird der Träger zum Schneiden und Entschützen entfernt, und in der Regel dauert ein DNA-Fragment unter 40 bps mindestens 2 Stunden, je länger die Kette ist, desto länger dauert es.
Verwenden Sie geeignete Reinigungsmethoden (wie OPC-Reinigung, PAGE-Reinigung, Entsalzungsreinigung, HPLC-Reinigung usw.), um die Reinheit des Produkts zu verbessern.
Die Sequenzierung der gereinigten DNA wird verifiziert, um sicherzustellen, dass ihre Sequenz den Erwartungen entspricht.