Die chromatografische Säule ist ein Kernbauteil der chromatografischen Analyse und ihre Leistung beeinflusst direkt den Trenneffekt und die Genauigkeit der Testergebnisse. Eine angemessene Wartung verlängert die Lebensdauer der Chromatografie-Säulen und verhindert einen Leistungsabfall oder Schäden durch unsachgemäßen Betrieb. Im Folgenden finden Sie eine detaillierte Anleitung zur Erhaltung der Chromatografie-Säulen, die die Installation, Verwendung, Lagerung und Wartung umfasst.

Vorbereitung vor der Installation

1. Erscheinungsprüfung

- Die neue chromatografische Säule muss vor der Verwendung überprüft werden, ob die Säule intakt ist und keine Risse, Kratzer oder Leckagen auftreten.

- Stellen Sie sicher, dass die Säulenverbindung mit dem Instrument übereinstimmt, um zu verhindern, dass das Gewinde nicht übereinstimmt, was zu Leckagen oder Beschädigungen führt.

2. Flusskompatibilitätsprüfung

- Spülen Sie die Chromatografie-Säulen vor der Verwendung mit einem niedrig viskosen Lösungsmittel wie Methanol oder Acenitril, um die restlichen Verunreinigungen im Produktionsprozess auszuschließen.

- Testen Sie die Kompatibilität der Flussphase mit der Chromatografie-Säule und vermeiden Sie die Verwendung von starken Säuren, starken Alkalinen oder korrosiven Lösungsmitteln (z. B. TFA ist vorsichtig zu verwenden).

3. Anpassung des Systems

- Stellen Sie sicher, dass der Druckwiderstand der Chromatografie-Säule mit dem Druck des Instrumentensystems übereinstimmt, um zu vermeiden, dass der Überdruckbetrieb zu einem Kollaps des Säulenbettes führt.

- Protokollieren Sie die Modelle und Spezifikationen der Chromatografie-Säulen (wie Partikelgröße, Durchmesser, C18-Abdeckung usw.) und verwenden sie streng unter den vom Hersteller empfohlenen Bedingungen.

Wartung im täglichen Gebrauch

1. Auswahl und Management der Flussphase

- pH-Kontrolle: Gegenphase-Chromatografie-Säulen (wie C18-Säulen) verwenden einen pH-Bereich von 2-8, über diesen Bereich kann die Silikonmatriz zerstören.

- Organisches Lösungsmittelverhältnis: Vermeiden Sie drastische Veränderungen des organischen Lösungsmittelverhältnisses in der Flussphase (z. B. direkter Wechsel von 100% Wasser auf 100% organisches Lösungsmittel), wobei ein Gradientenübergang erforderlich ist, um eine Kontraktion oder Ausdehnung des Säulenbettes zu verhindern.

- Filtration und Entgassung: Die Flussphase muss durch eine 0,22 μm Filtermembran gefiltert und mit Ultraschall entgasset werden, um kleine Partikel zu vermeiden, die das Säulenbett verstopfen oder Blasen stören.

2. Vorbehandlung der Probe

- Die Probe muss entweder zentrifugiert oder gefiltert werden (0,22 μm Filterfilm), um suspendierte Partikel oder Niederlage zu entfernen.

- Vermeiden Sie die direkte Eingabe von Proben mit hoher Konzentration und verdünnen sie auf den Bereich der Säulenkapazität (Bezug auf die vom Hersteller bereitgestellten Probenvolumenparameter).

- Komplexe Proben empfehlen die Verwendung von Schutzsäulen (Guard Column), um Verunreinigungen zu blockieren und die Lebensdauer der Hauptsäulen zu verlängern.

3. Durchfluss- und Druckregelung

- Streng im Einklang mit der empfohlenen Durchflussgeschwindigkeit der Chromatografie-Säulen, kann eine zu hohe Durchflussgeschwindigkeit zu einem zu großen Säulendruck führen und den Verschleiß der Füllstoffe beschleunigen.

- Die herkömmliche Gegenphase-Säulen-Durchflussgeschwindigkeit beträgt 0,5-2 mL/min und die Ultra-High-Efficiency Fluid Chromatography (UHPLC) Säulen-Durchflussgeschwindigkeit kann bis zu 0,1-0,5 mL/min niedrig sein.

- Wenn der Systemdruck plötzlich ansteigt, prüfen Sie sofort die Ursachen für Ausfälle (z. B. Verstopfung des Zylinderkopfes oder Verschmutzung der Siebplatte).

4. Spülen und Reinigen

Spülen Sie die Chromatografie-Säule nach jeder Anwendung für 10-20 Minuten mit reinem Wasser oder einem niedrig viskozen Lösungsmittel wie Methanol, um die restlichen Proben oder Salze zu entfernen.

- Nach langem Gebrauch können Säulenregenerationen durchgeführt werden (z. B. Rückspülung, Hochtemperaturreinigung oder chemische Regeneration), um die Säulenwirkung wiederherzustellen.

III. Lagerung und Aufbewahrung

Kurzfristige Lagerung (Tage bis Wochen)

- Reverse-Phase-Chromatografie-Säule: mit Methanol-Wasser (1: 1) oder reinem Methanol aufbewahren, um zu vermeiden, dass die Trocknung zu einem Riss der Füllstoffe führt.

- Positive Phase Chromatografie Säule: mit Positive Hexan oder Chlorform aufbewahren, um Wasseraufnahmefehler zu verhindern.

- Lagertemperatur bei Raumtemperatur, um Gefriere oder hohe Temperaturen zu vermeiden.

Langfristige Lagerung (mehr als 1 Monat)

- Entfernen Sie die Chromatografie-Säule vom Gerät und versiegeln Sie beide Enden gegen Verschmutzung.

- Lagern Sie an einem kühlen und trockenen Ort, um regelmäßig die Dichtheit zu überprüfen, um zu verhindern, dass Lösemittelflüchtigkeit zu einem Trockenriss im Säulenbett führt.

Regeneration und Reparatur der Säulen

1. Abwehr

- Geeignet für Fälle, in denen die Säulenwirkung abnimmt, aber nicht vollständig ausfällt, um die Füllstoffe durch Umkehrspülung neu zu ordnen, um die Gleichmäßigkeit des Säulenbettes wiederherzustellen.

- Die Rückflussgeschwindigkeit muss niedriger als die positive Durchflussgeschwindigkeit sein (z. B. 0,2 mL / min), und die Zeit wird in 10-30 Minuten gesteuert.

2. Chemische Regeneration

- Silikon-Matrix-Säule: kann mit 10% Methanol-Lösung eingeweicht und mit Ultraschall gereinigt werden, um hydrophobe Verunreinigungen zu entfernen.

- Polymersäule: Toleranz, kann mit hohen Konzentrationen von organischen Lösungsmitteln (wie reines Acenitril) gespült und regeneriert werden.

3. Regeneration bei hoher Temperatur

- Geeignet für hochtemperaturbeständige Chromatografie-Säulen (wie C18-Säulen), die Säulentemperatur auf 50-60 ° C zu erhöhen, mit Methanol zu spülen und fettlösliche Verunreinigungen auf dem Füllstoff zu lösen.

5. Häufig gestellte Fragen und Antworten

1. Erhöhter Säulendruck

- Ursache: Verstopfung des Zylinderkopfes, Verschmutzung der Siebplatte oder Zusammenbruch der Füllstoffe.

- Lösung: Spülen Sie den Zylinderkopf zurück, ersetzen Sie die Siebplatte oder regenerieren Sie die Chromatografie.

2. Spitzenverweiterung oder Schleppen

- Ursache: Alterung des Füllstoffs, Rückstände der aktiven Stelle oder unangemessener pH-Wert der Flussphase.

- Lösung: Passen Sie den pH-Wert der Flussphase an, regenerieren Sie die Chromatografie oder ersetzen Sie eine neue Säule.

3. Aufbewahrungszeit Drift

- Ursache: Änderung der Flussphase-Zusammensetzung, Kolonnentemperatur-Schwankungen oder Ausfall des Füllstoffteils.

- Lösung: Überprüfen Sie das Flussverhältnis, stabilisieren Sie die Säulentemperatur und regenerieren oder ersetzen Sie die Chromatografie-Säulen, wenn nötig.

VI. Hinweise

1. Vermeiden Sie den Eintritt von Blasen: Blasen zerstören die Säulenbettstruktur, wodurch sich die Füllstofflücke vergrößert und den Trenneffekt beeinflusst.

2. Deaktivieren Sie inkompatible Lösungsmittel: wie Tetrahydrofuran (THF) kann die Silikonmatriz lösen, sollten Sie vorsichtig bei der Verwendung sein.

3. Verwenderprotokoll aufzeichnen: Verfolgen Sie die Anzahl der Benutzungen, Probentypen und Wartungsvorgänge der Chromatografie-Säulen, um die Lebensdauer zu prognostizieren.