Der Flüssigchromatografische Fluoreszenzdetektor (FLD) ist ein hochempfindlicher, hochselektiver Detektor für Verbindungen, die Fluoreszenz erzeugen können, oder für Substanzen, die nach der Derivation leuchten. Sein Hauptvorteil besteht darin, dass die Empfindlichkeit vielfach so hoch ist wie der UV-Detektor und eine hohe Störungsbeständigkeit aufweist.
Der Arbeitsmechanismus des Fluoreszenzdetektors basiert auf photogenischen Phänomenen, die Kernschritte sind wie folgt:
Eine Lichtquelle (häufig verwendete Xenonlampe, Quecksilberlampe oder Laserdiode) sendet ein bestimmtes Licht aus, das über einen Monochromator (Raster oder Filter) einen einzigen Wellenlängenstrahlen filtert, der sich auf die Abflußflüssigkeit der Chromatoskomponente konzentriert. Wenn die zu testenden Komponentenmoleküle die angeregte Lichtenergie absorbieren, springen sie vom Grundzustand (Stabilitätszustand) in den angeregten Zustand (hoher Energiezustand).
Die fluoreszierende Emission des Moleküls im angeregten Zustand ist instabil, wird in einer sehr kurzen Zeit (10-8 ~ 10-4 Sekunden) durch nicht-strahlende Überbrüche einen Teil der Energie verlieren, zurück zum angeregten Zustand * niedrige Schwingungsenergieniveau, dann durch die Strahlungsüberbrüche die Photonen freigeben, zurück in den Grundzustand, der Prozess erzeugt Licht ist Fluoreszenz. Die Wellenlänge der Fluoreszenz ist immer größer als die Wellenlänge des angeregten Lichts (Stokes-Verschiebung), was ein Schlüsselmerkmal der Fluoreszenzdetektion ist.
Um Störungen durch das angeregte Licht zu vermeiden, ist das Fluoreszenzeimpfangssystem des Detektors (PMT oder Photodiode) in der Regel 90° Winkel zum angeregten Lichtweg angeordnet. Nachdem die emittierte Fluoreszenz durch einen Monochromator die charakteristische Fluoreszenzwellenlänge untersucht wurde, wird sie vom optischen Detektor empfangen und in ein elektrisches Signal umgewandelt. Die Intensität des elektrischen Signals und die Konzentration der zu messenden Komponenten sind innerhalb eines bestimmten Bereichs linear, und nach Verstärkung und Datenverarbeitung werden Chromatografikspitzen und quantitative Ergebnisse erhalten.
Prüfprozess:
Stimulierende Lichtquellen wie Xenonlampen oder Laser senden ein kontinuierliches Spektrum aus und wählen eine bestimmte Wellenlänge als Stimulierendes Licht nach Monochrom-Spektrifizierung aus.
Stimulierte Licht bestrahlt die fluoreszierenden Substanzen im Probenpool und erzeugt Fluoreszenz.
Fluoreszenzsignale werden durch Lichtwege in rechter Winkelrichtung (um Lichtstörungen zu vermeiden) von lichtempfindlichen Komponenten wie Photomultiplikatoren detektiert und in elektrische Signale umgewandelt.
Das elektrische Signal wird nach Verstärkung an ein Datenverarbeitungssystem übertragen, um ein Chromatogramm zu erzeugen.
Flüssigchromatografische Fluoreszenzdetektoren sind mit ihrer hohen Empfindlichkeit und hohen Selektivität ein wichtiges Werkzeug für die Spuranalyse, insbesondere in den Bereichen Biologie und Umwelt. Allerdings beschränken ihre Nicht-Universalität und Empfindlichkeit gegen Störungen den Anwendungsbereich. Durch die Kombination von Laserlichtquellen, Kombinationstechnologien oder Derivationsmethoden können ihre Analysefähigkeiten weiter erweitert werden, um komplexe Probenprüfungsanforderungen zu erfüllen.