Nukleinsäure-Proteinmessgeräte sind ein wichtiges Gerät für die schnelle Quantifizierung von Nukleinsäure (DNA/RNA) und Proteinkonzentrationen im Molekularbiologielabor. Der richtige Betrieb gewährleistet nicht nur die Genauigkeit der Daten, sondern verlängert auch die Lebensdauer des Instruments. In diesem Artikel werden Neulinge im Labor über die grundlegenden Betriebsvorschriften, häufig gestellte Fragen und praktische Tipps für Nukleinsäure-Proteinmeters informiert.
1. Vorbereitungen vor dem Betrieb
1. Kalibrierung des Instruments
- Leerkalibrierung: Vor jedem Gebrauch ist eine Leerkalibrierung mit ultrareinem Wasser oder Puffern wie TE-Puffern erforderlich, um Hintergrundstörungen zu beseitigen.
Regelmäßige Wartung: Wenn das Gerät lange nicht verwendet wird, müssen Sie es neu kalibrieren und überprüfen, ob die Lichtquelle und der Detektor normal sind.
2. Probenvorbereitung
Nukleinsäureproben: Stellen Sie sicher, dass keine Partikel oder Verunreinigungen vorhanden sind und entfernen Sie Verunreinigungen durch Zentrifugierung (12.000 Umdrehungen pro Minute, 1-2 Minuten), wenn nötig.
- Proteinproben: Vermeiden Sie hohe Konzentrationen von Entverunreinigungsmitteln (wie SDS), um die Absorptionsprüfung zu vermeiden.
3. Wählen Sie den richtigen Prüfmodus
UV-Absorptionsmethoden wie NanoDrop: geeignet für die schnelle Messung von DNA/RNA (260nm) und Proteinen (280nm).
Fluoreszenzmethoden (z. B. Qubit): Geeignet für die Detektion von Nukleinsäuren in niedrigen Konzentrationen mit höherer Empfindlichkeit.
2. Standardbetriebsprozesse
1. Start und Initialisierung
Öffnen Sie das Gerät und erwärmen Sie es für 5-10 Minuten (einige Geräte müssen länger erwärmen).
- Wählen Sie das entsprechende Testmuster (Nukleinsäure / Protein).
2. Probenahme und Prüfung
1. Reinigung der Prüfplattform: Tauchen Sie eine kleine Menge ultrareines Wasser oder Ethanol mit staubfreiem Papier, um die Prüffläche zu wischen, um Rückstände zu vermeiden.
2. Beispiel:
- NanoDrop-Instrumente: Tropfen Sie 1-2 µL Probe auf den Teststand und legen Sie den Testarm ab.
- Besserscheiben: Stellen Sie sicher, dass die Besserscheiben sauber sind und fügen Sie eine angemessene Menge an Proben hinzu (normalerweise 50-200 µL).
Lesen: Klicken Sie auf "Measure" und erfassen Sie die Daten.
Reinigung: Nach Abschluss der Prüfung reinigen Sie den Testtisch sofort mit ultrareinem Wasser oder Ethanol, um zu verhindern, dass die Kristallisation der Probe Auswirkungen auf die nachfolgende Prüfung hat.
3. Datenaufzeichnung und Analyse
Nukleensäure Reinheit Beurteilung:
- DNA: A260/A280≈1,8 (reine DNA), A260/A230> 2,0 (frei von Schadstoffen).
-RNA: A260/A280≈2,0 (reine RNA).
Abnorme Verhältnisse (z. B. A260/A280 < 1,6) können auf eine Protein- oder Phenolkontamination hinweisen.
Proteinmessung: Bei Verwendung der Bradford- oder BCA-Methode werden Standardkurven erstellt.
Häufige Fragen und Lösungen
Unregelmäßige Testergebnisse (z. B. niedriges Verhältnis A260/A280)
Mögliche Ursachen: Protein- oder organische Lösungsmittelkontamination.
Lösung: Reinigen Sie die Probe neu oder verwenden Sie eine fluoreszierende Quantifizierungsmethode (z. B. Qubit).
Instrumentfehler (z.B. „Sampletoo concentrated“)
Mögliche Ursache: Die Probenkonzentration liegt außerhalb des Testbereichs.
- Lösung: Nachdem die Probe verdünnt wurde, wird sie erneut untersucht.
3. Basislinie-Drift oder Instabilität
Mögliche Ursachen: Verschmutzung des Teststands oder Alterung der Lichtquelle.
Lösung: Reinigen Sie den Prüfstand oder wenden Sie sich an einen Ingenieur, um die Lichtquelle zu kalibrieren.
4. Praktische Fähigkeiten
1. Vermeiden Sie Blasenstörungen: Stellen Sie bei der Probenahme sicher, dass die Tropfen vollständig und keine Blasen sind, sonst führen Sie zu Schwankungen der Absorption.
2. Niedrige Konzentration Probenprüfung:
- Verwenden Sie eine Fluoreszenzmethode (wie Qubit), die empfindlicher ist als die UV-Methode.
Wenn eine UV-Methode verwendet werden muss, kann das Probenvolumen angemessen erhöht werden (z. B. 2 µL → 3 µL).
Langzeitlagerempfehlungen:
- Zumindest einmal wöchentlich einschalten, um Feuchtigkeit der optischen Komponenten zu verhindern.
In einer trockenen, staubfreien Umgebung aufbewahren.