Die mikrobielle Filtrationsprüfung ist der Prozess, bei dem Mikroorganismen in einer Probe durch physikalische oder chemische Methoden angereichert und anschließend die Zielbakterien isoliert und identifiziert werden. Diese Methode wird weit verbreitet in den Bereichen Wasserqualitätsprüfung, Arzneimittelsterilitätsprüfung, Lebensmittelmikrobielle Verunreinigungsanalyse und andere. Häufige Testobjekte sind Bakterien (wie E. coli, Staphylococcus aureus), Pilze (wie Schimmel, Hefe) usw. Genaue Trennung und Identifizierung sind der Schlüssel zur Sicherstellung der Zuverlässigkeit der Testergebnisse.
Mikrobiologische Filterung und Trennung
2.1 Vorbehandlung und Filterung der Probe
Die mikrobielle Filtration verwendet in der Regel Membranfiltration (MF), die für flüssige Proben (z. B. Wasser, Getränke) geeignet ist. Die Schritte sind wie folgt:
Probenvorbereitung: Homogenisieren Sie flüssige oder feste Proben (z. B. Lebensmittel müssen homogen verdünnt werden).
2. Filtration: Mikroben durch eine Filtermembran mit einer Apertur von 0,22 bis 0,45 μm abschließen.
Transfer: Der Filterfilm wird auf selektives oder nicht-selektives Medium angebracht.
2.2 Selektive Trennungstechnik
Verschiedene Mikroorganismen benötigen spezifische Medien und Kulturbedingungen:
Bakterien:
- E. coli: Verwenden Sie EMB (Irred Blue Agar) oder MacConkey Agar.
- Golden Staphylococcus: Verwenden Sie Glycerol High Salt Acid (MSA).
- Pilze:
- Schimmel und Hefe: Antibiotika hinzufügen, um das Bakterienwachstum zu unterdrücken, indem Sie Sandwich Glucose Acid (SDA) verwenden.
Mikrobiologische Identifikationstechnik
3.1 Morphologische Identifizierung
- Besonderheiten der Kolonie: Beobachten Sie die Form der Kolonie (Größe, Farbe, Kanten, Oberflächentextur).
- wie goldgelbe Staphylococcus ist goldgelb, glatt ausgehoben; Die Schimmelkolonie ist pelzig.
- Mikroskopische Beobachtung: Grant-Färbung (Unterscheidung von G - - Bakterien), Bacterien-Färbung usw.
3.2 Biochemische Versuche
Identifizierung von Bakterien durch metabolische Eigenschaften:
- Oxidase-Test: Unterscheidung zwischen False Monozyten (positiv) und E. enteri (negativ).
IMViC-Test: Identifizierung von E. coli (Ergebnismuster + + -).
Zuckerfermentationstests: wie Laktose Fermentationsfähigkeit unterscheiden E. coli und Salmonella.
3.3 Molekularbiologische Methoden
-16SrRNA-Sequenzierung: Der "Goldene Standard" für die Identifizierung von Bakterien, der auf der Ebene der Gattung oder der Spezies genau ist.
- PCR-Technik: Amplifikationstests für bestimmte Gene wie das uidA-Gen von E. coli.
MALDI-TOFMS: Schnelle Identifizierung von Mikroben durch Protein-Fingerabdruck-Karten.
Anwendungen und Herausforderungen
4.1 Praktische Anwendung
- Überwachung der Wasserqualität: Erkennung der gesamten Kolorenbakterie und pathogener Bakterien (wie Legion) im Wasser.
Sterile Prüfung von Arzneimitteln: Stellen Sie sicher, dass Injektionen und biologische Produkte keine mikrobiellen Verunreinigungen haben.
- Lebensmittelsicherheit: Erkennung von Salmonella, Listeria usw. in Lebensmitteln.
4.2 Technische Herausforderungen
1. Niedrige Fülle mikrobieller Detektion: Wenn der Zielbakteriengehalt in der Probe niedrig ist, muss die Kultur angereichert werden.
Mikrobielle Störungen: Komplexe Proben (z. B. Stuhl, Boden) müssen das selektive Kulturmedium optimieren.
Schnelle Identifizierung der Bedürfnisse: Traditionelle Methoden sind zeitaufwendig und erfordern die Förderung molekularer Biologie.