Die Umkehrschromatografie-Säulen können während der Verwendung auf eine Vielzahl von Fehlern stoßen, und hier sind Lösungen für diese Fehler:

1. Ungewöhnlich erhöhter Druck

1. Siebplatte verstopft

- Leistung: Der Säulendruck steigt oder schwankt erheblich.

- Lösung: Entfernen Sie die Siebplatte, legen Sie sie in 10% verdünnter Sticksäure für 10 Minuten mit Ultraschall reinigen und installieren Sie sie nach reinem Wasser. Es kann auch mit starken Lösungsmitteln umgekehrt gespült werden. Achten Sie darauf, positive Hochdruckstöße zu vermeiden.

2. Verunreinigung durch Füllstoffe

- Leistung: Die Zylinderkopffüllung ist mit starken Rückhaltestoffen bedeckt, was zu einer Abnahme der Zylinderwirkung führt.

- Lösung: Schrauben Sie die Säulenverbindung, graben Sie die verschmutzte Füllung aus der Oberfläche, ersetzen Sie sie durch eine neue Füllung und verdichten Sie sie. Diese Methode kann den Säuleneffekt teilweise wiederherstellen, aber es ist schwierig, das neue Säulenniveau zu erreichen.

3. Salzkristallisierung

- Leistung: Puffersalzkristall blockiert den Fluss, wenn die Flussphase hohe Konzentrationen von organischen Lösungsmitteln enthält.

- Lösung: Lösen Sie das Salz zuerst mit einer niedrigen Konzentration von Methanol / Wasser und wechseln Sie dann auf eine hohe Konzentration von organischer Phase.

2. Abnahme der Trennungseffekte

1. Anormale Spitzenform

- Schleppen / Gabel: Aufgrund des Kollaps des Zylinderkopfes oder der Erhöhung des Totvolumens müssen die Füllstoffe des gleichen Modells gefüllt und ausgeflacht werden. Wenn aufgrund von Metallverschmutzung, verwenden Sie eine hochreine Silikonsäule.

- Geisterspitze: Rückstände von Schadstoffen fließen bei hoher Temperatur aus und können durch erhöhte Endtemperatur-Backchromatografie entfernt werden.

2. Verringerung der Säulenwirkung

- Ursache: Festphasenverlust oder Silikongellösung.

- Lösung: Optimieren Sie den pH-Wert der Flussphase (Empfehlung 2 bis 9), um alkalische Bedingungen zu vermeiden, die die Bindungsphase-Hydrolyse beschleunigen.

3. Aufbewahrungszeitverschiebung

1. Mangelndes Gleichgewicht: Nach dem Austausch der Flussphase wird mindestens das 10-20-fache Volumengleichgewicht der Säulen erreicht.

2. Hydrophobe Zusammenbruch: C18 Säule langfristige Wasserphase führt zu einer Kontraktion der Poren, die Injektion von 5% organischer Phase-Wiederherstellung erforderlich ist.

4. Präventive Wartungsstrategie

1. Regeln des Betriebsprozesses

- Vermeiden Sie drastische Druckänderungen, das Schaltventil muss langsam sein.

- Der Flussphasenwechsel erfordert einen gradienten Übergang und verbietet die direkte Umstellung von reiner Wasserphase aus der organischen Phase.

2. Regelmäßige Tiefenreinigung

- Regelmäßiges Spülen: Spülen mit 95% Wasser - 5% Methanol → reinem Methanol → Isopropanol, jedes Lösungsmittel mindestens 10-faches Säulenvolumen

- Hartnäckige Schadstoffe: Proteinreste werden mit DMSO ausgewählt, Stärke wird mit Wasser gespült.

3. Optimierung der Lagerbedingungen

- Wenn Sie nicht lang verwenden, ist der Säulenspeicher voller Methanol oder Acenitril, um die Verbindungen festzuhalten, um zu verhindern, dass sie trocknen [^2^]. Es ist verboten, Puffer über Nacht zu halten.

Die Fehlerbehebung der Reverse Chromatography Column erfordert eine Kombination von physikalischem Spülen, chemischer Regeneration und Betriebsvorschriften. Nicht säulenbedingte Faktoren (z. B. Instrumentenstopfungen) werden vorrangig ausgeschlossen und die Probleme der Chromatografie selbst gezielt behandelt. Die Erstellung eines vollständigen Wartungsprotokolls, das die jeweiligen Spülbedingungen, Druckänderungen und Testergebnisse aufzeichnet, verlängert die Lebensdauer der Säulen erheblich.