Hocheffiziente Flüssigchromatografie Säulen als Kern Verbrauchsmaterial des HPLC-Systems, ihre Lebensdauer und die Präzision der Prüfung direkt verbunden, Wartung und Wartung Kern um "Anti-Verschmutzung, Anti-Schaden, Anti-Alterung" zu entwickeln, durch die Normierung des Betriebs zu reduzieren Festphasenverlust, Säulen Verstopfung und andere Probleme, spezifische Methoden nach "vor der Verwendung - während der Verwendung - nach der Verwendung - lange Inaktivität" den gesamten Prozess demontieren, unter Berücksichtigung der Praxis und Professionalität:
Vor der Verwendung: Vorbehandlung, um die Chromatografie Säulen von der Quelle zu schützen
Säulen Aktivierung und Gleichgewicht: Neue Säulen oder inaktive Chromatografie Säulen für mehr als 1 Woche, müssen 30-60 Minuten vor der Verwendung mit der Flussphase Gleichgewicht (Durchflussgeschwindigkeit 1,0 ml / min), um sicherzustellen, dass die Festphase vollständige Eindringung; Die Gegenphasensäulen (z. B. C18) können zunächst 20 Säulenvolumen mit Methanol/Wasser (90:10) spülen und dann in die Probenflussphase wechseln, um zu vermeiden, dass die Festphasetrocknung zu einer Leistungsabnahme führt. Wenn das Aufbewahrungslösungsmittel in der Säule mit der Flussphase nicht kompatibel ist (z. B. die Phasensäule wird mit Hexan aufbewahrt, die Flussphase ist Methanol), muss ein Übergangslösungsmittelgradient gespült werden, um zu verhindern, dass das Lösungsmittel Blasen oder einen Kollaps der Festphase erzeugt.
Probe und Flussphase Reinigung: Die Probe muss durch 0,22 μm Filterfilm gefiltert werden, Partikel, Suspensionen zu entfernen, um zu vermeiden, dass die Säulensiebplatte verstopft wird; Proben, die Verunreinigungen, Proteine und Fette mit hohem Siedepunkt enthalten, müssen im Voraus durch Methoden wie Festphasenextraktion (SPE) gereinigt werden, um zu verhindern, dass Verunreinigungen an der Festphase adsorbiert werden. Die Flussphase erfordert eine Ultraschallandegasung von 15-20 Minuten, um die Blasen zu entfernen (die Blasen können zu Säulendruckschwankungen und Spitzenformen führen); Bei der Verwendung der Puffer-Salz-Flussphase ist eine Zubereitung mit hochreinem Wasser (z. B. ultrareinem Wasser) erforderlich, die nach der Filtration jetzt verwendet wird, um zu vermeiden, dass Salzkristalle die Chromatografie-Säulen verstopfen.
Überprüfung des Zustands des Instruments: vor der Installation der Chromatografie-Säule, reinigen Sie die Eingangsöffnung der Probe, ersetzen Sie die Alterungskammer, um zu vermeiden, dass Kammerschmutz und Probenreste in die Säule gelangen; Überprüfen Sie, ob die Rohrleitung leckt oder verstopft ist, um sicherzustellen, dass der Druck vor der Säule stabil ist; Stellen Sie sicher, dass die Säulenverbindungen gut versiegelt sind, und wählen Sie eine passende Graphitmatte aus, um ein Leckage von Trägergas oder Druckungleichheiten zu vermeiden, die zu Säulenschäden führen.
2. Verwendung: Normalisieren Sie den Betrieb, um Säulenschäden zu vermeiden
Temperatur- und Druckregelung: strikte Einhaltung der maximalen Gebrauchstemperatur der Chromatografie-Säule (Gegenphase-Säule in der Regel ≤ 60 ° C, Ortophase-Säule ≤ 80 ° C), um den hohen Temperaturbeschleunigten Festphasenverlust zu vermeiden; Der Säulendruck muss im empfohlenen Bereich der Fabrik gesteuert werden (in der Regel ≤40MPa), wenn der Druck plötzlich um mehr als 30% ansteigt, muss sofort eine Ausfallprüfung durchgeführt werden (z. B. Filterströmungsphase, Reinigungsprobeneingang), um zu vermeiden, dass übermäßiger Druck zu einer Festphasenverdichtung und Kollaps des Säulenbettes führt. Die Erwärmungsgeschwindigkeit wird empfohlen ≤ 10 ° C / min, um zu vermeiden, dass die Stufensteigerung und der Stufenfall der Temperatur die Säulenstruktur zerstören.
Spezifikationen für die Verwendung von fließenden Phasen: Vermeiden Sie die Verwendung starker korrosiver Lösungsmittel (wie konzentrierte Salzsäure, Natriumhydroxid), der pH-Bereich der fließenden Phase der Gegenphasensäule muss auf 2-8 (außer speziellen Säure-Alkali-Säulen) gesteuert werden, außerhalb des Bereichs wird die Silikonmatrizlösung und die Festphase-Hydrolyse verursachen. Bei der Abwäsche des Gradienten sollte die Veränderung des organischen Verhältnisses nicht zu schnell sein (z. B. ≤ 10% pro Minute), um eine starke Kontraktion oder Ausdehnung der Festphase zu vermeiden; Nach der Verwendung der Flussphase mit Puffersalz muss die Flussphase rechtzeitig mit einem hohen Anteil an Wasser gespült werden, um Salzkristallisation zu verhindern.
Probenaufnahmebedingungen: Die Probenaufnahmemenge muss der Säulenkapazität entsprechen (konventionelle C18-Säulen-Probenaufnahmemenge ≤ 20 μL), um eine Überlastung zu vermeiden, die zu Spitzenverzug und Festphasenverschmutzung führt; Die Eingangstemperatur ist vernünftig eingestellt, höher als der maximale Siedepunkt der Probe 10-20 ° C, aber nicht mehr als die maximale Gebrauchstemperatur der Säule, um zu verhindern, dass die Probe zerbricht und Verunreinigungen verunreinigen. Vermeiden Sie die kontinuierliche Eingabe von hohen Konzentrationen und hohen Verschmutzungsproben, empfehlen wir, das Volumen von 10-15 Säulen nach jeder Eingabe von 10-20 Nadeln mit einer leeren Strömungsphase zu spülen.
Nach dem Gebrauch: rechtzeitige Reinigung und Verlängerung der Säulenlebensdauer
Regelmäßiger Reinigungsprozess: Nach dem Ende des Experiments wird die Chromatografie-Säule mit einem Flussphasengradienten gespült, um die restlichen Proben und Verunreinigungen zu entfernen. Umkehrsäule: Spülen Sie zuerst das Volumen von 20 Säulen mit Methanol / Wasser (50: 50) und spülen Sie dann das Volumen von 30 Säulen mit reinem Methanol oder Acenitril, um starke adsorptive Verunreinigungen zu entfernen; Phasensäulen: Spülen Sie das Volumen von 20 Säulen mit Hexan/Isopropanol (90:10) und bewahren Sie es mit reinem Hexan. Wenn die Probe Proteine, Fette und andere schwer zu waschende Verunreinigungen enthält, kann im Reinigungsprozess 5-10% Tetrahydrofuran (THF) hinzugefügt werden, um die Entfernungswirkung zu verbessern, aber beachten Sie die Kompatibilität von THF mit einer bestimmten Festphase.
Spezielle Verunreinigungsbehandlung: Wenn der Säulendruck erhöht ist und die Spitze schwerwiegend ist, kann es sich um eine Verunreinigung in der Säule handeln, die tiefgereinigt werden kann. Umkehrsäule: Spülen mit dem Gradienten von Methanol → Methanol / THF (80: 20) → Methanol → Acenitril, 20 Säulenvolumen pro Schritt; Phasesäule: Spülen mit Ortohexan → Ortohexan/Essigsäure (50:50) → Ortohexan. Spülen mit starken polaren Lösungsmitteln (z. B. Aceton, Dichlormethan) ist verboten.
Aufbewahrungsmethode: Kurzfristige Aufbewahrung (innerhalb von 1 Monat): Die Gegenphase-Säule wird mit reinem Methanol oder Acenitril versiegelt, die Phasensäule mit Positivhexan aufbewahrt, um sicherzustellen, dass keine Blasen in der Säule vorhanden sind; Langfristige Aufbewahrung (mehr als 1 Monat): Die Gegenphase-Säulen werden mit Methanol/Wasser (90:10) und die Phase-Säulen mit Hexan/Isopropanol (95:5) aufbewahrt, um eine Trocknungsalterung in der Festphase zu verhindern. Beim Aufbewahren müssen die beiden Enden der Chromatografie-Säule mit einem Block versiegelt und an einem kühlen, trockenen Ort (Temperatur 5-30 ° C) gelegt werden, um direktes Sonnenlicht zu vermeiden.
Durch die Wartung der oben genannten Spezifikationen kann die Lebensdauer der hocheffizienten Flüssigchromatografie-Säulen auf 1000-2000 Analysen verlängert werden, während die Genauigkeit und Wiederholbarkeit der Prüfdaten gewährleistet und die Nutzungskosten reduziert werden. Die Wartungsmethoden für verschiedene Arten von Chromatografie-Säulen (z. B. Ionenaustauschsäulen, manuelle Säulen) müssen mit Anpassungen der Herstelleranleitung kombiniert werden, die sich auf die Flussphase-Kompatibilität und die Eigenschaften der Festphase konzentrieren.