Die richtige Verwendung und Wartung der Chromatografie-Säulen ist sehr wichtig, und ein wenig Unvorsichtigkeit kann die Säulenwirkung verringern, die Lebensdauer verkürzen und sogar Schäden verursachen. Bei der chromatografischen Manipulation müssen die folgenden Themen beachtet werden, um die chromatografische Säule zu pflegen.
Vermeiden Sie drastische Änderungen von Druck und Temperatur sowie jegliche mechanischen Vibrationen. Eine plötzliche Temperaturänderung oder die Fällung der Säulen aus der Höhe beeinflusst den Füllzustand der Säulen; Die plötzliche Erhöhung oder Senkung des Säulendrucks wird auch die Füllung in der Säule impulsiv machen, daher sollte die Regelung der Durchflussgeschwindigkeit langsam erfolgen, und die Drehung des Ventils kann nicht zu langsam sein, wenn das Ventil in die Probe eingeführt wird (wie zuvor erwähnt).
Die Zusammensetzung des Lösungsmittels sollte allmählich geändert werden, insbesondere in der Gegenphase-Chromatografie, sollte nicht direkt von organischen Lösungsmitteln in Wasser geändert werden und umgekehrt.
In der Regel kann die Chromatografie-Säule nicht zurückgeschlagen werden, nur wenn der Hersteller angibt, dass die Säule zurückgeschlagen werden kann, kann sie die Verunreinigungen im Säulenkopf entfernen. Ansonsten verringert der Rückschlag schnell die Säulenwirkung.
Wählen Sie eine geeignete aktive Phase (insbesondere pH), um zu vermeiden, dass die Festphase beschädigt wird. Manchmal kann eine Vorsäule vor dem Probeneinsatzer angeschlossen werden, die Analyse-Säule ist Silikon gebunden, die Vorsäule ist Silikon, so dass die Aktivitätsphase vor der Analyse-Säule mit Silikon "gesättigt" ist, um zu vermeiden, dass das Silikon-Matrix in der Analyse-Säule gelöst wird.
5. Vermeiden Sie die Injektion komplexer Proben, insbesondere biologischer Proben, direkt in die Säule, die Vorbehandlung der Probe oder die Verbindung einer Schutzsäule zwischen dem Probeneinsatzer und der Chromatografie-Säule ist erforderlich. Schutzsäulen sind in der Regel kurze Säulen mit ähnlichen Festphasen gefüllt. Schutzsäulen können und sollten regelmäßig ersetzt werden.
6. Spülen Sie die Chromatografie-Säule häufig mit starkem Lösungsmittel, um die in der Säule gespeicherten Verunreinigungen zu beseitigen. Bei der Reinigung sollte der Ersatz der aktiven Phase im Flusssystem durch phasengemischtes Lösungsmittel allmählich übergehen, und das Volumen jeder aktiven Phase sollte etwa das 20-fache des Säulenvolumens sein, d. h. die herkömmliche Analyse erfordert 50 bis 75 ml.
Im Folgenden werden einige Chromatografie Säulen Reinigungslösungsmittel und Reihenfolge aufgeführt, als Referenz: Silikon Säulen mit positivem Alkan (oder Heptan), Dichlormethan und Methanol gespült, dann in der umgekehrten Reihenfolge gespült, alle Lösungsmittel müssen streng entwässert werden. Methanol kann zu den verbleibenden starken polaren Verunreinigungen gewaschen werden und das Alkan aktiviert die Silikonoberfläche wieder. Die Gegenphasensäule wird mit Wasser, Methanol, Acenitril, Monochlormethan (oder Chlorform) und in der umgekehrten Reihenfolge gespült. Wenn die im nächsten Schritt zur Analyse verwendete Aktivitätsfase keinen Puffer enthält, kann dieser Schritt mit Wasser gespült werden. Monochlormethan kann zu verbleibenden nicht-polaren Verunreinigungen wäschen, und die wiederholte Injektion von 100 bis 200 μl Tetrahydrofuran mehrmals beim Spülen mit Methanol (Acenitril) hilft, stark hydrophobe Verunreinigungen zu entfernen. Eine Mischung aus Tetrahydrofuran und Acenitril oder Methanol kann die Fette entfernen. Manchmal injiziert man auch mehrmals. Darüber hinaus kann eine gradiente Entfernung mit Acenitril, Aceton und Trifluoressigsäure (0,1%) die Proteinkontamination entfernen.
Die Ionenaustauschsäule kann mit einem dünnen Säurepuffer gespült werden, die Ionenaustauschsäule kann mit einem dünnen Alkalipuffer gespült werden, um das Salz zu entfernen, das starke Austauschleistung hat, und dann mit Wasser, Methanol, Dichlormethan (außer dem organischen Stoff, der an der Oberfläche der festen Phase adsorbiert wird), Methanol und Wasser gespült werden.
Bei der Speicherung der Chromatografie-Säule sollte die Säule mit Acetonitril oder Methanol bedeckt sein, und die Säulenverbindung muss festgezogen werden, um zu verhindern, dass das Lösemittel flüchtig trocknet. Es ist absolut verboten, die Pufferlösung über Nacht oder länger in der Säule zu lassen.
Wenn der Druck erhöht wird, kann ein Sinterfilter verstopft werden, wenn der Filter ersetzt oder zur Reinigung entfernt wird; Eine andere Möglichkeit ist, dass die großen Moleküle in die Säule gelangen, wodurch der Säulenkopf kontaminiert wird; Wenn die Säulenwirkung verringert wird oder die Chromatografiespitze deformiert wird, kann der Säulenkopf zusammenbrechen und das Totvolumen erhöht werden.
Wenn in den letzten beiden Fällen auftreten, schrauben Sie vorsichtig die Säulenverbindung und entfernen Sie die Säulenkopffüllung aus einer Höhe von 1 bis 2 mm mit sauberem kleinem Stahl (achten Sie darauf, die kontaminierte Füllung zu reinigen) und flachen Sie die Säulenfüllung aus. Füllen Sie die Chromatografie-Säulen dann mit einer befeuchten Festphase mit dem entsprechenden Lösungsmittel (die gleiche wie im Inneren der Säulen), flachen Sie sie aus und spannen Sie die Säulenverbindung an. Auf diese Weise wird die Leistung der Nachsäulen verbessert, aber es ist schwierig, auf das Niveau der neuen Säulen zurückzukehren.