Die Leistung der Flüssigchromatografie-Säulen als Kernkomponente eines High Efficiency Fluid Chromatography (HPLC)-Systems beeinflusst direkt die Genauigkeit und Wiederholbarkeit der Analyseergebnisse. Nach langem Gebrauch sammelt sich die stationäre Oberfläche allmählich Probenreste, Puffersalzkristalle oder starke Retentionsstoffe an, was zu einer Breitform der Spitze, einer Abnahme der Trennung und sogar zu einer Druckabweichung führt. Die wissenschaftliche saubere Wartung kann nicht nur die Säulenwirkung wiederherstellen, sondern auch die Lebensdauer der Chromatogrammsäulen erheblich verlängern. Im Folgenden finden Sie systematische Reinigungsprogramme und Betriebspunkte für verschiedene Verschmutzungsarten.
Basisspülung und Regenerationsprozess
1. Gradientreinigung
- Anwendungsszenarien: konventionelle organische Schadstoffe (z. B. Proteine, Peptide, kleinemolekulare Metaboliten).
- Betriebsschritte:
① Trennen Sie die Detektorverbindung, um zu verhindern, dass hohe Konzentrationen von Verunreinigungen in den Zirkulationsbecken gelangen;
② Methanol-Wasser (50: 50, v / v) als anfängliches Lösungsmittel, die Durchflussgeschwindigkeit ist auf 1/3 des normalen Durchflusses eingestellt (Beispiel: 4,6 mm ID-Chromatografie-Säule empfiehlt 0,8 ml / min);
Schrittweise erhöhen Sie das organische Verhältnis zu 95% Methanol, kontinuierlich spülen Sie 30 Minuten;
② Umkehren Sie die Rohrleitung zurück und spülen Sie 20 Minuten lang mit reinem Acetonitril mit niedriger Geschwindigkeit, um die hydrophoben Verunreinigungen mit dem Lösungsmittelersetzungseffekt zu beseitigen.
- Schlüsselparameter: Maximal tolerierter Druck ≤30MPa, Temperaturregelung unter 40 ° C.
2. starke Lösungsmittel Einweichen Methode
- Gegenstand: Fettlösliche Polymere oder harzartige Schadstoffe.
Details zur Umsetzung:
Herstellung einer Isopropanollösung mit 0,1% Trifluoressigsäure (TFA) und kontinuierliches Spülen mit niedriger Durchflussgeschwindigkeit (0,2 ml/min) über Nacht. Die saure Umgebung kann die Ionisierung fördern und die Löslichkeit alkalischer Verbindungen verbessern. Beachten Sie, dass diese Methode nicht für Bindungschromatografie Säulen außer Silikon-Matrix gilt.
Spezielle Strategien zur Entsorgung von Verschmutzungen
1. Entfernung von anorganischen Salzsetzungen
- Charakteristik des Phänomens: Basislärm erhöht, Geisterspitze auftreten.
- Lösungen:
Zweischrittsbehandlung: 1. Spülen Sie 30 Minuten mit deionisiertem Wasser unter niedrigem Druck; ② Wechseln Sie auf eine Methanol-Wasserlösung mit 0,05 mol / L EDTA (pH auf 7,0 eingestellt), chelieren Sie Metallionen und lösen Sie Calciumphosphatsablagerungen. Die Durchführung dieses Verfahrens einmal im Monat verhindert effektiv Salzschäden.
2. Biomolekulare Adsorption-Desisolation
- Schwierigkeitsanalyse: Nukleinsäuren / Proteine bilden leicht irreversible Adsorptionsschichten.
- Innovative Prozesse:
Konfigurieren Sie SDS (Natriumdioalkylsulfat)-Isopropanol-Mischung (Massenpunkt 0,1%) mit Ultraschallschockung zur Reinigung. Die Ultraschallfrequenz wird auf 40 kHz gewählt, die Amplitude wird so eingestellt, dass es genau so ist, dass Mikronenblasen entstehen, die die haftende Schicht entfernen können, ohne das Silikonskelett zu zerstören. Nach Abschluss muss der Oberflächenaktiv durch eine große Menge reines Wasser ersetzt werden.
III. Notfallbehandlung bei besonderen Arbeitssituationen
Bei schweren Verstopfungen können folgende unkonventionelle Methoden verwendet werden:
1. Umkehrtes Hochdruck-Impulsspülen
- Umkehren Sie die Chromatografie-Säule in das Zugangssystem, setzen Sie den Impulsmodus ein (Spitzendruck von bis zu 40 MPa, Dauer < 5 Sekunden / Sekunde), die Luft im Intervall injiziert wird, um die verbleibenden Partikel auszuschließen. Diese Methode beschränkt nur die anfängliche Verwendung von Metalloxidverschmutzung, und häufiger Betrieb kann zu einem Zusammenbruch der Füllstoffe führen.
2. Regeneration vor Ort bei hoher Temperatur
- Spezielle chromatografische Säulen für die Herstellung von hochtemperaturbeständigen keramischen Füllstoffen. Die langsame Erwärmung auf 300 ° C für 2 Stunden aufrechtzuerhalten, sodass der Kohlenstoff sich oxidiert. Der Kühlprozess muss die Kühlgeschwindigkeit (≤5 ℃ / min) streng kontrollieren, um thermische Spannungsrisse zu vermeiden.
Täglicher Schutz und Langzeitmanagement
1. Vorbehandlung
- Alle Proben müssen durch eine 0,22 μm Filtermembran gefiltert werden, es wird empfohlen, eine Schutzeinrichtung mit einer Vorsäule zu verwenden, um Partikelverunreinigungen abzuhalten. Für komplexe Matrixproben wird eine serielle Online-Festphase-Extraktionssäule zur vorläufigen Reinigung empfohlen.
2. Optimierung der Lagerbedingungen
Kurzfristige Ausfallzeiten (<7 Tage): in einer Methanol-Wasser-Lösung (80:20) aufbewahrt, beide Enden verschlossen gegen Flüchtigkeit;
- Langfristige Lagerung: Füllen Sie Stickstoff auf, um eine inerte Atmosphäre zu schaffen, und bewahren Sie es in einem Trockner vor Licht. Überprüfen Sie regelmäßig die Trends der Säulendruckänderungen und erstellen Sie ein Archiv des Lebenszyklus.
3. Anwendung intelligenter Überwachungssysteme
- Ausgestattet mit Drucksensoren zur Echtzeit-Überwachung der Druckdifferenz bei Eingang und Ausgang, löst das Spülverfahren automatisch aus, wenn ΔP die Alarmschwelle überschreitet (in der Regel 1,5-mal der Anfangswert). In Kombination mit dem Grad der Signalverdämpfung des UV-Detektors wird der Zustand der Säulendämpfung dynamisch bewertet.