Die Zellen freisetzen verschiedene Arten membranbasierter Bläschen in einer außerzellulären Umgebung. Diese membranbezogenen Veskeln werden als extrazelluläre Veskeln (EV) bezeichnet und umfassen Exokrosomen und Mikrofollikeln. Exokrosomen sind relativ kleine extrazelluläre Bläschen (30-150 nm), die Biomoleküle wie Nukleensäuren, Proteine, Enzyme und Lipide zwischen Zellen übertragen können und ein wichtiges Muster der interzellulären Kommunikation sind. Darüber hinaus können sie als Biomarker für eine Vielzahl von Erkrankungen oder als natürliche Medikamente-Delivery-Trägersysteme für die nächste Generation von Therapeutika verwendet werden.

In diesem Artikel beschreiben wir einen Ansatz zur schnellen und einfachen Trennung von Exosomen aus fettbasierten Stammzellen durch die Kombination von Hochgeschwindigkeits- und Übergeschwindigkeitszentrophoren. Zellen in BioBLU ® 0,3c in Einweg-Bioreaktionsbehälter kultiviert und von DASbox ® Minibioreaktor-Systemsteuerung. Das DASbox Mini-Bioreaktorsystem kann eine große Anzahl von Stammzellen kultivieren und somit einen hohen Output von Exosomen erzielen. Anschließend entfernten wir das bedingte Medium mit einer CR22N-Zentrifuge. Es handelt sich um eine Hochgeschwindigkeitszentrale mit einer RCF von bis zu 32.300 x g. In diesem Artikel haben wir eine feste Winkeldrehung R15A verwendet, die sowohl 10 x 50 mL als auch 10 x 15 mL Kegelrohre aufnehmen kann. Um die Exosomen weiter zu konzentrieren, verwendeten wir eine CP100NX-Überdrehzentrifuge mit einer maximalen RCF von 803.000 x g sowie einen P32ST-Horizontalrotor, der 6 x 40 mL Zentrifugerrohre aufnehmen konnte. Darüber hinaus können im Vergleich zur Kontrollgruppe, die keine Saccharose-Kissen verwendet, durch die Verwendung von Saccharose-Kissen in den Überzentrifugsschritten reine und homogene Exosome schnell isoliert werden. Während des gesamten Zentrifugalprozesses haben wir große Kapazitäten an Rotoren eingesetzt, wodurch wiederholte Zentrifugalschritte reduziert und die exosomale Trennzeit auf weniger als 4 Stunden verkürzt wurden, was schneller ist als andere Trennungsmethoden wie Fällung oder Filtration.