PolypeptidlöserDurch physikalische, chemische oder biologische Methoden werden die Peptidbindungen in der Polypeptidkette unterbrochen und komplexe Proteine in analysierbare Peptidsegmente umgewandelt.PolypeptidlöserSein technologischer Weg ist hauptsächlich in drei Systeme unterteilt:

Enzymlösung

Prinzip: Die spezifische Schneidfähigkeit von Bioenzymen (wie Panproteinase, Gastroprotease) verwendet, um unter milden Bedingungen (wie 37 ° C konstante Temperatur) die Peptidbindung bestimmter Aminosäurereste (wie Lysin, Argin) zu identifizieren und zu brechen.

Vorteile: Gleichmäßige Länge der Spaltprodukte, geeignet für polypeptidische Sequenzanalyse, Massenspektrometrie und andere Szenarien. Zum Beispiel kann die Pancreatase das Rinderserumabulin innerhalb von 16 Stunden in eine Peptidsegmentmischung mit einer theoretischen Abdeckung von über 80% auflösen.

Einschränkungen: Empfindlich für enzymatische Bedingungen (z. B. pH, Temperatur) und schwierig, Polypeptide mit hohen Mengen an Prolin oder modifizierten Aminosäuren zu verarbeiten.

Chemische Klärung

Prinzip: Durch starke Säure (wie 6M Salzsäure) oder starke Alkali (wie Natriumhydroxidlösung) unter hohen Temperaturen (100 ° C) zu erreichen, molekulare Brechung, geeignet für schwer abbaubares Kollagen, Keratin usw.

Vorteile: Hohe Effizienz des Spalts und die Verarbeitung komplexer Proben.

Einschränkungen: Die Reaktionsbedingungen sind intensiv und können zu unspezifischen Bruchen oder Modifikationen der Aminosäure-Seitenkette führen, die einen weiteren Reinigungsschritt erfordern.

Physikalische Auflösung

Prinzip: Verwenden Sie einen Laser (z. B. 193 nm Quasimolekular-Laserpuls), um eine lokale ultrahohe Temperatur in einer Nanosekundzeit zu erzeugen, die einen nicht-thermodynamischen Bruch der Peptidbindung verursacht.

Vorteile: Keine chemischen Reagenzreste, geeignet für Proben, die gegen chemische Verunreinigungen empfindlich sind (z. B. klinische Diagnoseproben).

Einschränkungen: hohe Gerätekosten und strenge Bedienungstechnikanforderungen.