PolypeptidlöserDie Betriebsanwendungen umfassen die Kalibrierung und Vorbereitung von Geräten, die Behandlung von Reagenzien und Proben, die Durchführung der Spaltreaktion, die Reinigung von Produkten und die Wartung von Geräten.PolypeptidlöserDie spezifischen Schritte und Vorsichtspunkte sind wie folgt:
Kalibrierung und Vorbereitung der Ausrüstung
Integritätsprüfung der Komponenten
Überprüfen Sie vor dem Einstart, ob die Stromkabel, Reaktoren, Pumpen, Ventile und andere Komponenten intakt sind, um sicherzustellen, dass keine Beschädigungen oder Lösen stattfinden. Wenn zum Beispiel eine Alterung des Reaktordichtrings festgestellt wird, muss er sofort ausgetauscht werden, um ein Gasleck während des Cracks zu vermeiden.
Stellen Sie sicher, dass die Lösungsmittelspeicherflasche eng mit der Gasleitung verbunden ist und keine Leckage besteht. Überprüfen Sie, ob der Druckluftdruck (AIR) bei 60-100psi und der Stickstoffdruck (N2) bei 5-10psi liegt.
Parameterkalibrierung
Parameter wie Risstemperatur, Druck und Durchflussgeschwindigkeit werden entsprechend den experimentellen Anforderungen vorgegeben. Zum Beispiel muss die Temperatur bei der Enzymolyse genau auf 37 ° C gesteuert werden und der Schwankungsbereich nicht mehr als ± 0,5 ° C ist.
Regelmäßige Kalibrierung von Temperatursensoren (alle halbjährlich bei Fehlern unter ±0,2 °C) und Drucksensoren (jährlich), um die Genauigkeit der Daten zu gewährleisten.
Vorwärmung der Anlage
Schalten Sie die Stromversorgung des Synthesizers ein, um das Gerät auf die eingestellte Reaktionstemperatur vorzuheizen. Die Vorwärmzeit variiert je nach Gerätemodell und Temperatur und erfordert Geduld.
Reagenzien und Probenbehandlung
Reagenzbereitung
Bereiten Sie Klysate (wie TFA/Wasser/Triisopropylsilikan = 95:2,5:2,5), Aktivierungsmittel (wie HBTU, DCC), Lösungsmittel (DMF, DCM) usw. vor, um sicherzustellen, dass alle Materialien frisch und rein sind und Verunreinigungen vermieden werden.
Bestätigen Sie sich, dass das Reagenz keine Fällung oder Verschlechterung hat, empfehlen Sie, das Reagenz vor der Filtration zu verwenden und das Datum der Öffnung anzugeben, und das abgelaufene Reagenz wird rechtzeitig verabschiedet.
Probenvorbehandlung
Vorbehandlung von hochviskozen oder partikelhaften Proben durch Zentrifugierung, Filtration usw. zur Verhinderung von Verstopfungen oder Schäden am Pumpenkörper. Zum Beispiel kann eine unbehandelte Probe zu einer 40% höheren Verschleißrate des Pumpenkörpers führen.
III. Durchführung der Spaltungsreaktion
Harz und Aminosäure Fixierung
Wählen Sie einen geeigneten Festphasenträger wie Rink Amide Resin aus, lösen Sie das Harz mit Dichlormethan (DCM) auf und trocknen Sie das Ersatz nach der Entfernung der Verunreinigungen.
Die Zielaminosäuren werden mit dem Aktivierungsmittel gemischt, um den aktiven Ester zu bilden und in den Reaktor zu geben, um sich mit den abgeschützten Aminosäuren zu binden, um eine Peptidbindung zu bilden.
Spaltungsreaktion
Fügen Sie eine vorgekühlte Lyese (z. B. eine TFA-Mischung) hinzu und rühren Sie 2 Stunden bei Raumtemperatur. Temperatur, Druck und andere Parameter müssen während des Crackprozesses in Echtzeit überwacht werden, um ungewöhnliche und rechtzeitige Ausfallprüfungen zu entdecken.
Nach der Klärung wird die Reaktionsflüssigkeit abgegeben, das Harz entfernt und das Harz dreimal mit Lösungsmitteln wie TFA gewaschen und das Filter verschmelzt.
4. Reinigung der Produkte
Konzentration und Niederlage
Die Lysate werden im Rotationsverdampfer auf ein kleines Volumen bei Raumtemperatur konzentriert und Methyl-tert-Butylether (MTBE) zugefügt, um das Polypeptid auszusetzen.
Die Abfälle werden durch Zentrifugierung (10.000 U/min, 10 min) gesammelt, dreimal mit kaltem Ether gewaschen und bis zum groben Peptid getrocknet.
Hocheffiziente Flüssigchromatographie (HPLC)
Die Reinigung erfolgte mit einer C18-Gegenphasensäule mit einer Flussphase A von 0,1 % TFA/Wasser und einer Flussphase B von 0,1 % TFA/Acenitril. Sammeln Sie die Zielspitze unter gradienten Abwasserbedingungen (Phase B steigt von 10% auf 60% innerhalb von 0-30 Minuten).
Nach HPLC-Reinigung kann die Polypeptidreinheit von 85% auf 98% erhöht werden.
V. Wartung und Instandhaltung der Ausrüstung
Tägliche Reinigung
Spülen Sie nach jedem Gebrauch die Innenwände des Reaktors mit deionisiertem Wasser, um die restlichen Lysate und die Proteinfragmente zu entfernen. Bei hartnäckigen Flecken können Sie nach Einweichen mit einem enzymatischen Waschmittel spülen.
Die Rohrleitung wird wöchentlich mit 75% Ethanol oder 0,1% Natriumhypochlorat-Lösung zirkuliert, um die Vermehrung von Mikroben zu verhindern. Nach der Desinfektion muss die Leitung mit Stickstoff getrocknet werden.
Verschleißbare Teile ersetzen
Alle drei Monate wird die Elastizität der Dichtungsringe überprüft und bei Härtung oder Riss muss sofort ausgetauscht werden. Wechseln Sie den Einluftfilter alle 1-2 Monate, um zu verhindern, dass Staub ins Innere der Anlage gelangt.
Versorgung mit vierteljährlich speziellen Schmierstoffen (z. B. Siliziumschmierstoffe) für bewegliche Komponenten wie Pumpenkörper, Ventile und andere, um den Reibungsverlust zu reduzieren.
Langzeitlagermanagement
Wenn Sie das Gerät nicht verwenden, lagern Sie es an einem trockenen, belüfteten und lichtgeschützten Ort, um direktes Sonnenlicht und feuchte Umgebung zu vermeiden. Stellen Sie sicher, dass das Gerät von korrosiven Gasen und Flüssigkeiten fernsteht.
Auf die metallische Oberfläche des Geräts ein rostfreies Öl (z. B. Vaseline) auftragen und einen Staubschutz abdecken.