Einführung

Die theoretische Grundlage für die Auswahl der Proben auf der Flüssigchromatografie

In der Flüssigchromatografie können Proben auf zwei verschiedene Weise abgeprobt werden: Feststoff oder Flüssigkeit. Die Flüssigkeitsprobe wird nach dem Auflösen der Probe in einem Lösungsmittel direkt auf die Chromatografie-Säule eingespritzt. Bei Feststoffen wird eine gleichmäßige Mischung aus einer groben Probe und einem festen Trägermaterial (z. B. Silikon) vor der Chromatografie-Säule gelegt.

Jede Technologie hat ihre besonderen Aspekte, die berücksichtigt werden müssen, die im Folgenden näher diskutiert werden.

Wie Flüssigkeit.

Eine flüssige Probe ist eine Methode, um eine Probe gut in der Entwaschung des ursprünglichen Lösungsmittels zu lösen, und kann in Flash- und Prep-Flüssigchromatografieanwendungen verwendet werden. Es wird empfohlen, schwach polare Lösungsmittel zu verwenden, da starke polare Lösungsmittel die Trennung verringern.

Flüssigkeitsproben werden als einfache und schnelle Methode angesehen, können jedoch zu Probenverlusten führen, wobei folgende Faktoren berücksichtigt werden müssen:

• Löslichkeit der Verbindungen im ursprünglichen Lösungsmittel: Die Probe muss gelöst werden, da die Niedersetzung im Probeneinsatzsystem oder an der Spitze der Chromatografie-Säule zu hohen Druck im System verursachen kann und schließlich zu einem Probenverlust führt.

• Polarität des gelösten Lösungsmittels: Wenn eine Probe mit einem polaren Lösungsmittel gelöst wird, können sie an der polaren Silikonsäulenmatrix adsorbiert werden und sich nachteilig auf die Trennung von mehr polaren Verbindungen auswirken (Verbindungen, die später auf dem Silikonmaterial gespült werden).

• Volumen des Probenlösungsmittels: Je größer das Volumen ist, desto höher ist das Risiko, dass die Probe von Anfang an in das Füllsäulenbett migriert, was zu einer Bandbreite und einer geringeren Trennung führt. Das ideale Probenvolumen sollte nicht mehr als 10% des Volumens der Chromatografie-Säule überschreiten. Je höher die Retentionsrate der Probe ist, desto größer ist das geladbare Volumen.

• Probengröße: Jede Chromatografie-Säule hat eine bestimmte Belastungsmenge. Die ideale Probengröße sollte die maximale Belastungsmenge der Reinigungssäule nicht überschreiten.

In der Flash-Flüssigchromatografie wird die Flüssigkeitsprobe in der Regel manuell mit Hilfe einer Spritze direkt an die Spitze der Chromatografie-Säule eingespritzt (wie in der Abbildung unten). Aufgrund des hohen Rückdrucks ist eine manuelle Probenaufnahme auf der Prep-Flüssigchromatografie-Säule nicht möglich.

Daher wird es durch ein spezielles Probenventil durchgeführt, wie in der Abbildung gezeigt:

Feststoff.

Feststoffproben sind Technologien, die ausschließlich für Flash-Chromatografie-Trennungsanwendungen geeignet sind, für Proben, die nur in starken Lösungsmitteln gelöst werden können, oder für Proben mit schwer löslichen klebrigen oder vielfältigen Verunreinigungen. Diese Methode kann die Auflösung verbessern, indem die Spektralbandbreite und der anschließende Drag-to-Drag-Effekt reduziert werden. In der Regel trennt sich die Feststoffprobe langsamer, hat aber eine höhere Auflösung als die Flüssigkeit. Die empfohlene Probenmenge sollte die maximale Probenbelastung der Chromatografie-Säule nicht überschreiten.

Die Feststoffaufnahme erfolgt in der Regel durch folgende Schritte:

• Die Rohprobe wird in einem geeigneten polaren Lösungsmittel gelöst.

• Die Mischung wird dann für ein paar Minuten in einem Ultraschallbad ultraschallt, um die Löslichkeit zu erhöhen.

• Filtern Sie die Mischung, um noch nicht gelöste Substanzen zu entfernen.

• Zu der oben genannten Mischung wird Silikon mit dem 5-fachen Gewicht der groben Probe hinzugefügt.

• Das Lösungsmittel wird durch einen Rotationsverdampfer unter Druck destilliert.

• Schließlich wird die Mischung aus groben Proben und Silikon in einen Feststoffprober geladen und vor der Chromatografie-Säule montiert. Verbinden Sie die Lösungsmittelwäsche.

• Die zu trennenden Komponenten werden kontinuierlich aus dem Feststoffprober in die eigentliche Trennschromatografie gespült.

Unterstützungsmaterialien spielen eine entscheidende Rolle in der Feststoff-Oberflächentechnik: Sie absorbieren grobe Proben, so dass die aufgewaschten Verbindungen besser übertragen und verteilt werden können. Es kann auch die Probe an der richtigen Stelle befestigen. Dies ist sehr vorteilhaft für anspruchsvolle Proben wie ölige Extrakte.

Nicht gebundenes Siliciumdioxid ist ein häufig verwendetes Adsorptiv, ist jedoch möglicherweise nicht die beste Wahl. Normalerweise wird empfohlen, Silikon der gleichen Art wie die Chromatografie Säule als Stützmaterial zu verwenden. Dadurch können unerwünschte chemische Wechselwirkungen oder irreversible Adsorption der Probe vermieden werden. Eine nützliche Alternative ist Celithe, das aufgrund seiner neutralen chemischen Eigenschaften nicht mit irgendeinem Stoff interagiert.

Schlussfolgerungen

Zusammenfassend, Flüssigkeitsproben und Festkörper haben Vorteile und Nachteile, können je nach der Probeneigenschaft und dem Testzweck ausgewählt werden, differenzierte Operationen, um Zielreine Verbindungen zu erhalten.

Tabelle 1: Unterschied zwischen Feststoff und Flüssigkeit