Einer,Vollautomatischer PolypeptidsynthesizerKalibrierung und Vorbereitung von Geräten

Installation und Inbetriebnahme

Die Installation und Inbetriebnahme der Anlage werden von Fachtechnikern durchgeführt, um sicherzustellen, dass die Anlage ordnungsgemäß funktioniert.

Überprüfen Sie, ob die Lösungsmittelspeicherflasche mit der Gasleitung gut verbunden ist und ob alle Teile des Instruments intakt sind.

Schalten Sie den Synthesizer-Netzschalter und den Druckluftschalter ein, um zu überprüfen, ob der Druck den Bereich entspricht (z. B. der Druck des Messgeräts "AIR" ist größer als 60 psi und kleiner als 100 psi); Der Messdruck "N2" ist größer als 5 psi und kleiner als 10 psi).

Kalibrierung und Prüfung

Kalibrieren und Testen der Geräte gemäß den Anweisungen des Herstellers, um sicherzustellen, dass alle Systeme wie Pumpen, Ventile, Detektoren usw. ordnungsgemäß funktionieren.

Durchführung von Temperatur-, Barcode-, Reaktor-Mischung-, Flüssigkeitsnadel- und Aminosäureflaschentests; Elektromagnetventilprüfung; Durchflusskalibration von chemischen Reagenzflaschen und Aminosäureflaschen; UV-Kontrollkalibrierung.

Auswahl des geeigneten Reaktionsbehälters

Wählen Sie den geeigneten Reaktionsbehälter entsprechend der Synthesegröße aus und stellen Sie sicher, dass das Material des Behälters nicht mit Reagenten oder Lösungsmitteln reagiert.

Reagenzien und Materialvorbereitung

Reagenzbereitung

Bereiten Sie Aminosäuren, Aktivierungsmittel, Lösungsmittel usw. zur Synthese vor, um sicherzustellen, dass alle Materialien frisch und rein sind, um die Einführung von Verunreinigungen zu vermeiden.

Gemäß dem Syntheseschema werden die gewünschten Stoffverhältnisse gewogen, um die Genauigkeit zu gewährleisten.

Das Reagenz wird in die entsprechend gekennzeichneten Lagerflaschen geladen.

Harz Vorbereitung

Fügen Sie das Harz in einen Festphasensynthesator hinzu, lösen Sie es mit einem geeigneten Lösungsmittel wie DCM auf und trocknen Sie es.

Waschen Sie das Harz mit Lösungsmitteln wie DMF, um Verunreinigungen zu entfernen, und trocknen Sie das Ersatz nach dem Waschen.

3. Synthetische Operationen

Setzen der Reaktionsbedingungen

Die geeigneten Reaktionsbedingungen basierend auf der Sequenz und der Länge der gewünschten Polypeptide, einschließlich Temperatur, Druck, Zeit usw., werden festgelegt.

Entschützen

Entfernen Sie die Schutzgruppe der vorherigen Aminosäure, damit sie mit der nächsten Aminosäure reagieren kann.

Zum Beispiel wird mit einer 40%igen Trifluoressigsäure-/Dichlormethanlösung geschützt und anschließend mit Dichlormethan, Methanol usw. gewaschen.

Verknüpft

Neue Aminosäuren werden mit geschützten Aminosäuren gebunden, um eine Peptidbindung zu bilden.

Die erste Aminosäure, die in der Regel am C-Ende beginnt, wird mit einem bestimmten Volumen DMF gelöst und mit einem Reduzierungsmittel (wie DCC, HBTU usw.) aktiviert.

Die aktivierte Aminosäure-Lösung wird in den Festphasensynthesator gelegt, DMF auf die geeignete Reaktionskonzentration ergänzt und zur Konzentration gerührt.

Waschen

Reinigen Sie nicht reagierte Substanzen und Nebenprodukte, um die Reinheit der Reaktion zu gewährleisten.

Nach jedem vollständigen Syntheseschritt müssen Nebenprodukte und nicht reagierte Rohstoffe durch Waschen entfernt werden, um die Ansammlung von Verunreinigungen zu reduzieren.

Wiederholung der Schritte

Wiederholen Sie die Entschutz- und Kopplungsschritte, bis die Polypeptidkette die vorgegebene Länge erreicht hat.

Produktschneiden und Reinigung

Harz auflösen

Konfigurieren Sie das Lyst (das in der Regel starke Säuren wie TFA enthält) und bewahren Sie es im Gefrierschrank.

Das Peptidharz wird in den Reaktor hinzugefügt, das vorgekühlte Lysit hinzugefügt und die Reaktion gerührt, um das Polypeptid vom Harz abzulösen.

Nach der Klärung wird die Reaktionsflüssigkeit freigegeben, das Harz entfernt und mit Lösungsmitteln wie TFA gewaschen.

Polypeptidreinigung

In einem Rotationsverdampfer wird das Lyst auf ein kleines Volumen bei Raumtemperatur konzentriert.

Verwenden Sie geeignete Fällungsmittel (z. B. Methyl-tert-Butylether), um das Polypeptid auszusetzen und durch Zentrifugierung, Waschen usw. Rohpeptide zu erhalten.

Rohpeptide werden mit Methoden wie der Hocheffizienten Flüssigchromatografie (HPLC) gereinigt, um Verunreinigungen zu entfernen und Zielpeptide zu isolieren.

Konzentrieren, Filtern und Gefriertrocknen

Die gereinigte Polypeptidlösung wird verdampft, um das organische Lösungsmittel zu entfernen und eine konzentrierte Polypeptidlösung zu erhalten.

Die konzentrierte Polypeptidlösung wird steril gefiltert.

Die gefilterte Polypeptidlösung wird in den Gefriertrockner gelegt und ein geeignetes Aufwärmverfahren für die Gefriertrocknerbehandlung eingerichtet.

V. Qualitätskontrolle und Aufzeichnung

Überwachung des Reaktionsprozesses

Überwachen Sie den Reaktionsprozess mit geeigneten Prüfmethoden (z. B. UV-Detektion, Massenspektrometrie usw.), um sicherzustellen, dass jeder Schritt der Reaktion wie erwartet abläuft.

Aufzeichnungen und Berichte

Aufzeichnen Sie die Betriebsparameter und die Ergebnisse jedes Schrittes detailliert, einschließlich der Verwendung von Reagenzien, Reaktionszeit, Temperatur, Druck usw.

Erstellen Sie Versuchsberichte, die Informationen wie Schlüsseldaten und Produktreinheit zusammenfassen.