PolypeptidsynthesizerDie Kalibrierung ist ein zentraler Bestandteil der Gewährleistung der Reinheit, der Ausbeute und der Wiederholbarkeit der Versuche von synthetischen Produkten und erfordert eine systematische Kalibrierung von Schlüsselmodulen wie Eingangsgenauigkeit, Temperaturregelung, Druckstabilität und Prüfsystemen. Im Folgenden finden Sie einen Schritt-für-Schritt-Kalibrierungsprozess, der den Branchenspezifikationen für Mainstream-Festphase-Polypeptide-Synthesizer entspricht.
Vorbereitung vor der Kalibrierung: Umgebung und Vorbehandlung der Ausrüstung
Bestätigung der Umgebungsbedingungen: Stabilisieren Sie die Labortemperatur bei 20-25 ° C (Schwankungen ≤ ± 1 ° C), die relative Luftfeuchtigkeitskontrolle bei 40% -60%, um die Luftströmung direkt zu vermeiden. Eine Stunde vor der Kalibrierung starten Sie die Vorwärmung, um sicherzustellen, dass alle Module in einem stabilen Betriebszustand sind.
Vorbereitung von Werkzeugen und Standardstoffen: Bereitstellung von Standardausrüstungen (z. B. Elektronwagen der Klasse 0,01 mg, Standard-Thermometer, Präzisionsdruckmesser, 100 μL-Standardpipetten) sowie Kalibrierungsreagenzien wie wasserloses Methanol (chromatografisch rein) und eine Standardlösung von Triketon (0,1 mol/L).
Reinigung und Prüfung der Ausrüstung: Entfernen der Zufuhrleitung, der Reaktionssäule und trocknen mit wasserlosem Methanol dreimal; Überprüfen Sie den Druck der Stickstoffflasche (≥0,5 MPa) und ersetzen Sie die alternde Dichtungsmasse, um sicherzustellen, dass die Rohrleitung keine Leckagen hat.
Kalibrierung des Kernmoduls: Präzise Steuerung der Schlüsselparameter
(1) Kalibrierung des Flüssigkeitseintragssystems: Gewährleistung der Dosiergenauigkeit des Reagents
Kalibrierung des Durchflusses der Zufußpumpe: Wählen Sie das häufig verwendete Zufußvolumen (10 μL, 50 μL, 100 μL), setzen Sie die Zufußgeschwindigkeit auf 10 μL/s ein, fügen Sie das Ende der Zufußleitung in ein vorgewogenes sauberes Zentrifugrohr ein und starten Sie das Zufußverfahren. Jeder Volumengradient wird dreimal wiederholt und die gesammelte Masse des wasserlosen Methanols mit einer elektronischen Waage gewogen, basierend auf der Dichte des Methanols (0,7918 g / ml bei 20 ° C) berechnet das tatsächliche Eingangsvolumen, der Fehler muss ≤ ± 2%, ansonsten wird der Druck des Pumpenkörpers angepasst oder der Dichtkreis ersetzt.
Präzisionskalibrierung der Reagenzverteilung: Verbinden Sie verschiedene Reagenzverleitungen jeweils mit der Standard-Pipette-Schnittstelle, setzen Sie eine einzige Verteilungsmenge von 50 μL ein, verteilen Sie sie 10 Mal in die Kapazitätsflasche, überprüfen Sie den Gesamtvolumenfehler mit der Kapazitätsmethode, um sicherzustellen, dass ≤ ± 1%; Die zeitliche Differenz bei der gleichzeitigen Überprüfung der synchronen Verteilung mehrerer Rohrleitungen dauert ≤0,5 Sekunden.
Kalibrierung von Temperatur- und Drucksystemen: Stabile Reaktionsumgebung
Reaktionstemperaturkalibrierung: Einfügen Sie das Standard-Thermometer in die Reaktionssäule (in der Nähe des Harzbereichs), einstellen Sie jeweils 25 ℃, 30 ℃, 40 ℃ drei häufig verwendete Temperaturpunkte, nach 30 Minuten der Isolierung lesen Sie den Temperaturwert, jeder Punkt wiederholt sich 3 Mal, der Fehler muss ≤ ± 0,5 ℃. Bei Überschreitung korrigieren oder ersetzen Sie die Heizelemente anhand der Parameter des Gerätetemperaturmoduls.
Stickstoffdruckkalibrierung: Schließen Sie den Reaktionssäulenausgang, verbinden Sie das Präzisionsdruckmesser mit dem Stickstoffeingang, stellen Sie den Druck 0,1 MPa, 0,2 MPa, 0,3 MPa ein, stabilisieren Sie die Lesung nach 5 Minuten, der Fehler muss ≤ ± 0,01 MPa sein. Testen Sie die Stickstoffblasgeschwindigkeit nach der Kalibrierung, um sicherzustellen, dass das Harz gleichmäßig und spritzfrei gedreht wird.
(3) Kalibrierung von Prüf- und Steuermodulen: Gewährleistung einer genauen Prozessüberwachung
Kalibrierung des Triton-Detektionssystems: Zubereitung von Triton-Standardlösungen mit einer Konzentration von 0,01 mmol / L, 0,05 mmol / L und 0,1 mmol / L, durch die automatische Probenahme von Geräten, Aufzeichnung der Absorptionswerte und Zeichnung der Standardkurve, der Korrelationskoeffizient muss ≥ 0,995 sein. Wenn die Linearität schlecht ist, erkennen Sie den Lichtweg rein oder ersetzen Sie die Lichtquelle.
Programmsteuerung Kalibrierung: Erstellen Sie ein Standard-Syntheseprogramm (einschließlich Entschützung, Waschen, Kopplung von 3 Schritten), um die Abweichung der tatsächlichen Ausführungszeit und der eingestellten Zeit jedes Schrittes aufzunehmen, jeder Schritt wird 5 Mal wiederholt, die Abweichung dauert ≤ ± 1 Sekunde. Überprüfen Sie die Leitungswechselreaktion beim Schrittwechsel, um sicherzustellen, dass keine Kreuzkontamination durch Reagenzreste entsteht.
Validierung und Aufzeichnung nach der Kalibrierung: Sicherstellung der Gültigkeit der Kalibrierung
Überprüfung des Leerlastbetriebs: Durchführung eines kalibrierten Leerlastsyntheseprogramms, 3 Zyklen in Folge, Überprüfung des Betriebszustands der einzelnen Module, um sicherzustellen, dass keine Leckage, Echo, Parameter-Drift und andere Probleme auftreten.
Validierung der Standard-Peptid-Synthese: Auswahl von Standard-Pentapeptiden (wie Leu-Enkephalin) zur Synthese, HPLC-Prüfung der Produktreinheit ≥ 95% und Abweichung ≤ ± 2% mit historischen Daten nach der Kalibrierung, um den Kalibrierungseffekt zu bestätigen.
Archiv der Kalibrierung: Detaillierte Aufzeichnung des Kalibrierungsdatums, der Umgebungsbedingungen, des Kalibrierungspersonals, der Standardausrüstungsnummern, der Kalibrierungsdaten der einzelnen Module und der Abweichungswerte, Einfügen des Kalibrierungs-Qualifikationslogos und Definition des nächsten Kalibrierungszyklus (empfohlen, alle sechs Monate oder nach 500 Synthesen vorzeitig zu kalibrieren).